DB22_T2560-2016_水貂病毒性肠炎检疫技术规范_吉林省.docx
ICS11.220
DB22
B41
吉林省地方标准
DB22/T2560—2016
水貂病毒性肠炎检疫技术规范
Quarantineprotocolforminkviralenteritis
吉林省质量技术监督局发布
DB22/T2560—2016
前言
本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。
本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口于吉林省畜牧业管理局。
本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，中国农业科学院特产研究所。
本标准主要起草人：王伟利、王建科、孟庆峰、程悦宁、易立、姚贵哲、王准、宋翱、程世鹏。
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DB22/T2560—2016
水貂病毒性肠炎检疫技术规范
1范围
本标准规定了水貂病毒性肠炎的病原分离鉴定、HA-HI试验、PCR、Real-timePCR及动物回归试验
等诊断技术要求。
本标准适用于水貂病毒性肠炎的检疫、疫情监测和流行病学调查。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析试验室用水规格和试验方法
3缩略语
下列缩略语适用于本文件
MEV：水貂肠炎病毒
F81：猫肾传代细胞
CPE：细胞病变
——离心管（1.5mL、0.2mL）
——试验动物：3月龄健康水貂（水貂肠炎病毒HI抗体效价≤1∶4）
4.2试剂
——DEPC双蒸水（双蒸馏水1000mL、DEPC1mL，室温放置28h以上，0.105MPa蒸汽高压30min。
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DB22/T2560—2016
4℃或室温保存）
——培养液（DMEM粉10g、碳酸氢钠3.7g，溶于1000mL双蒸水中，抽滤分装，4℃保存）
——营养液（DMEM培养液900mL、犊牛血清100mL，加青霉素、链霉素，使其浓度分别达到200IU/mL、
200μg/mL抽滤除菌）
——维持液（DMEM培养液980mL、犊牛血清20mL，加青霉素、链霉素使其终浓度分别达200IU/mL、
200μg/mL，抽滤除菌）
——胰蛋白酶溶液（胰酶2.50g、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）0.20g、无钙镁PBS
1000mL，抽滤除菌，4℃保存备用）
——新生犊牛血清
——青霉素
——链霉素
——阿氏液（葡萄糖2.05g、拘椽酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.82g、双蒸馏水二级水
中溶解后，用盐酸将pH值调至6.1，高压蒸汽灭菌20min，最后用二级水定容至100mL，4
℃保存备用。）
——蛋白酶K（三羟甲基氨基甲烷（Tris）（pH7.8）1.20mg（0.01mmol/L）、乙二胺四乙酸
（EDTA）1.86mg（0.005mmol/L）、SDS5.00g、三蒸水1000mL、加入蛋自酶K，使成为
20mg/mL，即为贮存液；使用浓度为50μg/mL）
——RNaseA（20μg/mL，10mmol/LTris-HCl（pH8.0）1.21g、15mmol/LNaCl0.89g、RNase
A0.02g，加去离子水使其终浓度为20μg/mL。分装，－20℃保存备用）
——Tris饱和酚
——酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）
——TE（pH8.0）（10mmol/LTris-Cl（pH8.0）1.21g、lmmol/LEDTA（pH8.0）0.37g、去
离子水800mL，调节pH至8.0，用去离子水定容至1000mL）
——TaqDNA聚合酶（5U/μL）
——dNTPs（每种浓度均为10mmol/L）
——50×Tris-冰乙酸（TAE）电泳缓冲液（Tris282.0g、冰乙酸57.10g、0.5mol/LEDTA（pH
8.0）100mL，三蒸水定容至1000mL，0.105MPa蒸汽高压30min，备用）
——溴化乙锭溶液（10mg/mL）（三蒸水100mL、溴化乙锭1g，置棕色瓶中，磁力搅拌数小时以
确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器保存于室温）
——1%琼脂糖凝胶（琼脂糖1g、TAE电泳缓冲液（50倍）2mL、灭菌三蒸水98mL、微波炉中完
全融化，加溴化乙锭溶液）
——猪的红细胞：1%猪红细胞悬液（用20mL注射器先吸取5mL阿氏液，从健康猪耳静脉采血
10mL左右立即混匀，