免疫学检测方法与免疫技术课件.ppt

免疫学检测与免疫学技术CompetitiveRIA/ELISAforAgMethodcont.DetermineamountoflabeledAgboundtoAb?NH4SO4?anti-IgImmobilizetheAbQuantitativeMostsensitivetest+?Test+Patient’ssampleLabeledAg+ConcentrationdeterminedfromastandardcurveusingknownamountsofunlabeledAgSolidPhaseSolidPhase*免疫学检测与免疫学技术Chapter10.免疫学检测方法与免疫技术一、概述免疫学检验方法和免疫化学技术主要包括：抗原抗体的制备、纯化和鉴定，免疫扩散、免疫电泳、免疫凝集试验、补体结合试验，免疫细胞分离、纯化和鉴定，免疫功能检测，细胞因子检测，放射免疫检测，免疫酶标检测，荧光和发光免疫技术，免疫组化实验方法，原位杂交免疫组化，免疫PCR技术，免疫微球的应用，免疫电镜技术，细胞凋亡的检测方法，膜受体分析，胞内钙镁浓度的测定和细胞间通讯，流氏细胞仪技术及应用等。从上述内容可以看出，免疫技术是免疫学和物理、化学及电子信息和分子生物学理论和技术的结合产物。其应用涉及生命科学的各个领域，已成为现代医学和生物学研究工作不可缺少的有效工具。免疫学检测与免疫学技术免疫技术的原理和特点：基于免疫应答的理论，即抗原抗体的特异性反应。基于免疫细胞的结构、应答特性和分子基础。具有特异性高度灵敏性；可重复性；广泛适用性；快速反应性；可观察性；可定性、定量，即可控性；组化定位特性等特点。概括起来可分为：沉淀反应，即可溶性抗原和抗体间的反应。凝集反应，即颗粒性抗原和抗体间的反应。免疫标记，即用酶、同位素、荧光素或电子致密物质标记。免疫印渍，即用标记抗体与待测蛋白质印迹结合。单抗及工程抗体技术，即分子生物技术。流氏细胞术，即荧光标记，流体喷射，激光和能谱检测，电脑分析。免疫学检测与免疫学技术Ag-Abreactions

TestsforAg-Abreactions免疫学检测与免疫学技术NatureofAg/AbReactionsLockandKeyConceptNon-covalentBondsHydrogenbondsElectrostaticbondsVanderWaalforcesHydrophobicbondsReversibleMultipleBondsSource:Li,Y.,Li,H.,Smith-Gill,S.J.,Mariuzza,R.A.,Biochemistry39,6296,2000免疫学检测与免疫学技术Affinity=?attractiveandrepulsiveforcesAbAgHighAffinityAbAgLowAffinityAffinityStrengthofthereactionbetweenasingleantigenicdeterminantandasingleAbcombiningsite免疫学检测与免疫学技术CalculationofAffinityAg+Ab?Ag-AbKeq=[Ag-Ab][Ag]x[Ab]ApplyingtheLawofMassAction:免疫学检测与免疫学技术AvidityTheoverallstrengthofbindingbetweenanAgwithmanydeterminantsandmultivalentAbsKeq=104Affinity106Avidity1010Avidity免疫学检测与免疫学技术SpecificityTheabilityofanindividualantibodycombiningsitetoreactwithonlyoneantigenicdeterminant.Theabilityofapopulationofantibodymolecules