《免疫学检测技术及应用》课件.ppt

免疫学检测技术及应用;免疫学检测技术应用： 1. 疾病的诊断、治疗效果评价及发病机理探讨： 如：感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反应、肿瘤等 2. 免疫分子的定性、定量测定： 如：细胞因子、粘附分子、细胞受体、补体、抗体等; 3. 抗原物质的定性、定量检测： 如：病原微生物及其代谢产物，组织细胞、蛋白质等 4. 免疫细胞的分离、鉴定及功能测定： 如：T细胞及其亚群等;抗原－抗体反应 抗原与相应抗体在体内或体外相遇可发生特异性结合，呈现的某种反应现象。 ;抗原抗体反应有以下几个特点: 1.抗原与抗体结合是特异性结合 表位(抗原)——超变区(抗体) 2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合 氢键、疏水键、静电引力和范德华力(Van der waal‘s force) 、电子云力的合力。 抗原和抗体可解离,性质不变。 ; 3.抗原抗体反应可分为两个阶段 （1）特异性结合阶段 此阶段需时短,仅需几秒到几分钟,无可见 反应出现 （2）可见反应阶段 需时较长,数分,数小时或数日出现可见现 象,表现为沉淀,凝集,细胞溶解等 4.抗原和抗体结合是否呈现明显可见的反应现 象,与两者的分子比例密切相关 ;抗原抗体反应包括： 沉淀反应 凝集反应 溶解反应 补体结合反应 中和反应 已知抗体 检测未知抗原； 已知抗原 检测未知抗体。;Sensitivity of varior immunoassays;一、沉淀反应(precipitation) 可溶性抗原与相应抗体在电解质存在条件下结合，出现沉淀物的现象。 沉淀反应的试验方法：环状法 絮状法 琼脂中沉淀法 ; 琼脂中沉淀反应法： 双向免疫扩散(double immunodiffusion) 单向免疫扩散(single radial immunodiffusion) 对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) 火箭电泳(rocket electrophoresis) 免疫电泳(immunoelectrophoresis) ; 二、凝集反应(agglutination) 颗粒性抗原或吸附于颗粒上的可溶性抗原(或抗体)于相应抗体(或抗原)，在电解质存在下出现凝集物的现象。;凝集反应包括： ◆ 直接凝集反应 (direct agglutination) ◆ 间接(被动)凝集反应(indirect/passive agglutination) ◆ 间接凝集抑制试验(indirect agglutination inhibition test) ◆ 协同凝集试验(coagglutination test) ◆ 抗球蛋白试验(antiglobulin test，Coomb’s test) ;三.免疫标记技术 用荧光素、同位素、酶及发光等示踪物质标记抗体(或抗原)，与抗原(或抗体)进行反应，通过检测示踪物质，分析被检抗原(或抗体)的存在或含量的方法。 灵敏度：高，1X10-4 ～1X10-5ug抗体/ml 应用：微量物质的定性、定量或定位。 ;免疫标记技术的基本类型： （一）免疫荧光技术(immunofluorescence technique) （二）免疫酶技术(immunoenzymatic technique) （三）同位素标记技术(isotope labelling technique) （四）发光免