20 免疫学检测技术.ppt

二 淋巴细胞及其亚群分离 玻璃黏附法 （分离单核细胞和淋巴细胞） 尼龙毛分离法 （分离B细胞和T细胞） E花结分离法 (分离T细胞和B细胞） 补体细胞毒法（分离抗原阳性和阴性细胞） 免疫吸附分离法 （分离CD4+T和CD8+T) 免疫磁珠法 （分离T亚群） 流式细胞术等等 （细胞类型和数量） 免疫细胞及其功能检测 * 荧光染色的细胞悬液和鞘液混合 ↓N2压力 流室（形成鞘包悬液的层流） ↓喷嘴高速喷下 ↙ ↓ ↘ 光 源 极光束交会 散射光→散射光监测器 →计算机→分析处理 荧光→荧光监测器 ↓ ↓ 获得细胞类型数量信息 高频震荡器 ↓ 细胞分离提纯系统 输出 极向偏转板 ↓分析鉴别 带不同电荷的不同类的细胞在电磁场中偏离 ↓ ↓ 收集于不同容器中 流式细胞术 * 流式细胞仪分选技术原理示意图 * 磁珠分离法 将已知抗细胞表面标记(如CD4）的Ab交联于微珠，与细胞悬液反应后，微珠借Ab结合于相应细胞群或亚群表面。再将细胞悬液加于一柱内，并置磁场中，因微珠被磁场吸引，将磁珠结合的细胞与磁珠非结合细胞分开。从而获得CD4+T细胞。 ＋ → → ＋ － * （一）T细胞功能测定 1 T细胞增殖试验 ①形态学观察法 ②3H-TdR渗入法 ③MTT比色法 三 淋巴细胞功能测定 免疫细胞及其功能检测 2 T细胞分泌CK功能测定 ①生物活性测定 ② 免疫学测定 ③分子生物学检测 3 特异性抗原皮试 结核菌素试验（ OT试验 ） 前臂5U，48－72小时，红肿硬结＞5mm为阳性。皮试（+）表示有一定的细胞免疫能力。 * 免疫细胞及其功能检测 三 淋巴细胞功能测定 （二）B细胞功能测定 1 B细胞增殖试验 ①形态学观察法 ②3H-TdR渗入法 ③MTT比色法 2 酶联免疫斑点法 SRBC+待检B细胞+补体+琼脂糖液→倾注平皿→温育1-3小时 3 溶血空斑形成试验：检测B细胞产生抗体的能力 * 免疫细胞及其功能检测 三 淋巴细胞功能测定 （三）细胞毒活性测定 测具有细胞毒作用的淋巴细胞的活性。 1 乳酸脱氢酶释放法 2 51Cr释放法 3 凋亡细胞检测法 * 免疫细胞及其功能检测 四 吞噬细胞功能测定 1 中性粒细胞趋化功能测定 1）滤膜渗透法 2）琼脂糖平板法 2 中性粒细胞吞噬功能测定 1）显微镜检查法 2）硝基蓝四氮唑试验 3）荧光标记试验 单核-巨噬细胞功能检测 1）炭粒廓清试验 2）吞噬功能检测 * 免疫分子基因检测 1 Southern 印迹杂交 2 斑点印迹杂交 3 聚合酶链反应（PCR) 4原位杂交和原位PCR 5 荧光定量PCR * * * * 分布于动植物体内的一种生长因子；亲和素是卵白和某些微生物中的蛋白质，由四个亚单位组成，能与生