植物油脂 叶绿素a和叶绿素a降解产物的测定（脱镁叶绿素a，a和焦脱镁叶绿素）.pdf
植物油脂—叶绿素a和叶绿素a降解产物的测定（脱镁叶绿素a，
a和焦脱镁叶绿素）
1范围
本文件界定了植物油脂中叶绿素降解产物脱镁叶绿素a，a和焦脱镁叶绿素a测定的术语，描述了叶
绿素降解产物脱镁叶绿素a，a和焦脱镁叶绿素a的测定原理、试剂、仪器设备、样品制备、操作步骤、
结果计算、精密度和测试报告等。
本文件适用于植物油脂。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
ISO661动植物油脂试样的制备（Animalandvegetablefatsandoils—Preparationoftestsample）
注：GB/T15687—2008动植物油脂试样的制备（ISO661:2003,IDT）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
焦脱镁叶绿素a（叶绿素降解产物中的含量）pyropheophytina（contentinchlorophyll
degradationproducts）
焦脱镁叶绿素a的质量除以脱镁叶绿素a，a和焦脱镁叶绿素a的质量之和。
4原理
使用微型硅胶柱将色素（叶绿素、脱镁叶绿素a和a、焦脱镁叶绿素a）从脂质主要部分（甘油三酯）
分离。用RP18-HPLC分析洗脱液，并使用可见-紫外光检测器在410nm处监测分离组分。
某些植物油（如菜籽油）的分析需要更高的灵敏度，可使用荧光检测器，激发波长为430nm，发射
波长为670nm。
也可以使用附录A中描述的HPLC荧光检测直接进行测定。
5试剂
警告——请注意有关危险物质处理的具体规定。应遵循技术、组织和个人安全措施。
分析过程中，除非另有说明，否则只使用分析纯试剂。
5.1叶绿素a。
1
注：由于缺少脱镁叶绿素和焦脱镁叶绿素标准物质，所以用叶绿素a来生产这些降解产物。脱镁叶绿素是通过叶绿
素溶液酸化获得的；焦脱镁叶绿素需要额外加热(100°C)(参考[4])。
5.2丙酮。
5.3甲醇。
5.4乙醚。
5.5石油醚，沸程40℃-60℃。
5.6正庚烷或正己烷。
警告：由于其毒性，如果有正庚烷，应避免使用正己烷。
5.7石油醚和乙醚混合物，体积分数:石油醚=90mL/100mL;乙醚=10mL/100mL。
6仪器设备
常规的实验室仪器以及以下所述仪器设备。
6.1高效液相色谱仪。
6.1.1高效液相系统：由泵、进样装置(20µL环路)或自动进样器、410nm处测量的可见-紫外光检测
器或荧光检测器(激发波长λex=430nm，发射波长λem=670nm)，以及一个积分系统。
6.1.2高效液相色谱柱，长度250mm，内径4.0mm或4.6mm，填充反相C18颗粒，粒径5µm。
以下条件被认为是合适的:
1)
——固定相:ODS硅胶微粒3.5µm,250mm×4.6mm;
——流动相:水、甲醇、丙酮(6.1.3);
——流速:1.0mL/min。
6.1.3流动相，水、甲醇、丙酮混合物，体积分数:φ水=4mL/100mL;φ甲醇=36mL/100mL;φ丙酮
=60mL/100mL，所有溶剂均为色谱级。
6.2锥形烧瓶，容量25mL或50mL。
6.3烧杯，不同容量的。
6.4旋转蒸发仪，带水浴。
6.5自动进样瓶，合适的容量。
1)例如，商业上可用的10.5%碳负荷的C18反相，封头使硅烷醇失活，以减少对离子抑制剂或离子配对剂的需要。
这个信息是为本国际标准的使用者提供方便，不构成ISO对本产品的认可。
2
6.6硅胶柱，500mg/6mL或1000mg/6mL,55µm,7nm或二醇柱，3mL。
注