浮游植物叶绿素A测定的“热乙醇法”及其测定误差的探讨.pdf

维普资讯 kSci．(湖泊科学)，2006，18(5)：550—552 http：∥www．jlakes．org．E—mail：jlakes@niglas．ac．cn @ 2006byJournalofLakeSciences 浮游植物叶绿素 a测定的 “热乙醇法”及其测定误差的探讨 陈宇炜，陈开宁，胡耀辉 (中国科学院南京地理与湖?白研究所，南京210008) 摘 要：详细介绍了一种国际上通用的浮游植物叶绿素 a测定方法 一热乙醇萃取法，并根据文献记载和作者多年的实践 经验，对这种测定方法可能产生的误差进行全面的探讨，为国内水环境研究人员尽快掌握这种方法提供了科学的参考． 关键词：浮游植物；叶绿素 a；热乙醇萃取法；误差 Discussion on possibleerrorfor phytoplankton chlorophyll-a concentration analysisusing hot-ethanolextractionmethod CHEN Yuwei．CHEN Kaining＆ HU Yaohui (NanjingInstituteofGeographyandLimnology，ChineseAcademyofSciences，Nanjing210008) Abstract：Hot—ethanolextractionmethodisawidelyusedmethodintheworldtodeterminephytoplanktonchloro． phyll—aconcentration．Thispaperaimstointroducethehot—ethanolextractionmethodindetailtoallthescientists dealingwithaquaticenvironmentresearchinChina．Byexperiencefrom theauthors，possibleerrorduringtheoper- ationoftheanalysiswasdiscussed． Keywords：phytoplankton；chlorophyll—a；hot—ethanolextractionmethod：elTor 浮游植物的种群生物量 (Phytoplanktonbiomass)是水生生态系统研究的一个重要指标，而浮游植物叶 绿素a含量通常可以用来快速估算种群生物量 ，因此浮游植物叶绿素 a含量的测定成为浮游植物生物量的 重要指标而被广泛应用…． 浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法 (HPLC法)、荧 光光度计法和分光光度计法等。．高效液相色谱法 能够很精确地测定各种光合色素的含量 ，但由于仪器 昂贵 ，分析操作步骤繁琐 ，一般不能用于野外大量样品的快速分析．荧光光度计也能够精确地测定叶绿素a 的含量 ，特别是能够测定叶绿素含量较低的样品，但由于分析过程中容易受其他色素或色素衍生物的干扰， 也不利于快速分析各类不同的野外样品 ．因此，分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素a的测定方 法．在所有分光光度计法中，根据所用的色素萃取液分为了丙酮法、甲醇法和乙醇法等，再根据比色所用的 波长，又分为单色法和多色法 (例如单色丙酮法和四色丙酮法)等 ． 自从Strickland和 Parsons 首先用90％丙酮作为萃取剂分析浮游植物叶绿素 a含量以来，有大量的研 究进行针对性的方法改进．尽管丙酮现在仍广泛用于实际分析中，但由于丙酮的萃取效率比较差，特别是对 蓝藻的叶绿素a的萃取效率比较低，使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂．不过 ，甲醇对人体毒害性 大，且在酸化过程中容易产生误差 ，于是，乙醇成为现在广泛应用的叶绿素a萃取剂．Jespersen和Christ． offersen…较系统地比较了乙醇，甲醇和丙酮作为叶绿素萃取液的优缺点，特别是比较了用乙醇作为萃取剂 在不同浓度梯度 (96％一83．5％)，不同的萃取时间(6—24h)以及不同的萃取温度 (20℃和70℃)下的萃 取效率，为热乙醇萃取法的推广应用提供了较好的理论基础． 近 30年来 ，由于中国水环境的恶化 ，特别是水体富营养化的问题，使得浮游植物叶绿素a的测定被广 · 国家重点基础研究发展规划项 目(973项 目，2002CB412305)和国家 自然科学基