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微生物细胞数目的测定技术 一、显微镜直接计数法 定义 将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片（计菌器）上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 常用计菌器 常用计数器有血细胞计数板(血球计数板)、Petroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等。 血细胞计数板：较厚，不能使用油镜观察，只能计数较大的霉菌孢子和酵母菌； 而后两种计菌器细菌，可以使用油镜观察，因此可以直接计数细菌。 最常用：血细胞计数板技术法。 直接计数法优缺点 优点：直观、快速、操作简单。 缺点： 不能区分死菌与活菌，所得为总数； 不适于对运动细菌的计数。 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各列有一个方格网。 每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。 计数室的刻度一般有两种规格：一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格。 另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格； 计数方法 计算： 1mL菌液中总菌数=A/5*25*104*B=50000*A*B 1mL菌液中总菌数=A/5*16*104*B=32000*A*B 其中B为稀释倍数。 注意事项 对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。 对于压线酵母，按照数上不数下、数左不数右的原则计数。 计数器洗干净，勿刷。 勿损坏计数器。 二、平板菌落计数法 平板菌落计数法根据微生物在固体培养基上所形成的菌落一般由一个细胞繁殖而成的原理进行。 * * 微生物的生长通常以群体的生长作为指标。群体生长表现为细胞数目的增加或者细胞物质的增加。 测定微生物数量的主要方法： 显微镜直接计数法（不辨死活） 平板菌落计数法（形成菌落的微生物） P32 光电比浊法（不用于颜色太深的样品） 测定细胞重量法（测定丝状真菌生长量） 测定细胞总氮量或总碳量（适于浓度较高的样品） 。。。。。。 血球计数板 Petroff-Hauser计菌器 Hawksley计菌器 无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为lmm，则每一个大方格的面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm，所以计数室的容积为0.lmm3(万分之一毫升)。 使用血球计数板计数时，通常数5个中方格的总菌数A，然后求每个中方格的平均值，再乘上大方格（计数室）中方格的数量，就得出一个大方格中的总菌数。数两个大方格总菌数，平均后，再换算成每毫升菌液中微生物细胞的数量。