牛源致病性大肠杆菌O78型的分离与鉴定.pdf

奶牛 2017·2 保健 DAIRY HEALTH 牛源致病性大肠杆菌O78型的分离与鉴定 1 1 2 李天芝 ，于新友 ，沈志强 (1.山东绿都生物科技有限公司，滨州 256600；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州 256600) 中图分类号：S858.23 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2017）02-0026-04 DOI: 10.19305/ki.11-3009/s.2017.02.007 摘 要：本研究对山东省东营市某牛场病死牛的病料进行了病原菌的分离，并对分离菌株进行形态学观察、 生化试验、PCR鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示，本研究成功分离到一株O78型大肠杆菌，药 敏试验结果证实该菌株具有多重耐药性；致病性试验结果显示该菌株对昆明系小白鼠具有一定的致病性。 关键词：牛源；致病性大肠杆菌；分离；鉴定 20 16年3月份 ，山东省东营市某牛场新生犊牛出现 1.3 试剂及耗材 不 同程度 的食欲不振 、精神沉郁 、不愿站 立 、呼吸急 草酸铵结 晶紫 、革兰 氏碘液 、石炭酸复红染液 、 促 、全身衰弱、排灰 白色水样稀粪和肛 门周围、腹部及 血琼脂平板 、普通营养琼脂平板 、麦康凯营养琼脂培养 后肢有粪便黏附症状 ，有的病牛眼眶下陷 ，最后陷入脱 基和 肉汤液体培养基均 由本公 司质检部提供 ；DL2000 水状态 ，衰竭死亡。剖检发现肠 内有灰 白色稀粪 ，混有 Marker、TaqDNA聚合酶均购 自宝生物工程 （大连 ）有 血丝和气泡 ，肠黏膜 出血 ，部分肠黏膜脱落 ，肠系膜淋 限公司 ；DNA 回收试剂盒和质粒小量提取试剂盒购 自生 巴结肿大 ，真 胃有凝乳块 ，胃黏膜水肿 、充血 ，肝脏有 工生物工程(上海)股份有限公司 ；药敏纸片 、糖发酵管 出血点 ，心 内膜 出血。笔者通过试验排除了球虫、隐孢 及生化试验用各种试剂购 自杭州天和微生物试剂有限公 子虫、牛轮状病毒和牛病毒性腹泻病毒感染的可能 ，从 司 ；大肠杆菌O型单价 阳性标准血清购 自中国兽 医药品 病死牛 的肝脏和肠 系膜淋 巴结病料 中分 离鉴定 出一株 监察所。 O78型牛大肠杆菌 ，并对其进行 了药敏试验和致病性试 1.4 试验设计 验 ，为该菌株 的后续工作奠定 了基础。 1.4.1 引物设计与合成 根 据 Ge n Ba nk 中大肠杆 菌 LEE毒 力 岛的eaeA 基 1 材料与方法 因序列(AJ223063) ，设计 1对 引物 ，上游 引物 ：5 ′- 1.1 病料 ATAAACCGTGGTCTCAGCAAATCG -3 ′ ，下游 引 无 菌 采 取 病 死 牛 部 分 肝脏 、肠 系膜 淋 巴结 作 为 物 ：5′- ATCACCATCAATACTCAACGGG -3′ ，扩 病料 。 增片段 1 043bp。引物 由生工生物工程(上海)股份有限 1.2 试验动物 公司合成。 20只 18~22g清洁级 昆