一例仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验.pdf

１００ 养猪 SWINE PRODUCTION (２) 2017 一 例 仔 猪 致 病 性 大 肠 杆 菌 的 分 离 鉴 定 与 药 敏 试 验 １ ２ ２ １ １ １ ２ １，２ 祖立闯 ，谢金文 ，姚春阳 ，孟 霞 ，齐继红 ，赵家磊 ，李 峰 ，沈志强 （ 山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 ； 山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州 ） １． ２５６６００ ２． ２５６６００ 中图分类号：S８５８．２８ 文献标志码： A 文章编号：１００２-１９５7(２０１7)０２-０１００-０３ 摘 要 为确定仔猪的死亡原因并为猪场及时制定防控措施提供参考依据，对病料样品进行镜检 观察、细菌分离培养与纯化、分离菌株 的形态特征观察、生化试验、致病性试验、１６S rRNA 序列鉴 定等，最终鉴定为仔猪致病性大肠杆菌。 药敏试验结果显示，分离菌株在 １３ 种常见药物中对环丙 沙星、头孢曲松钠、阿奇霉素、氧氟沙星、头孢噻呋、头孢噻肟、阿莫西林、氟苯尼考 ８ 种药物高度敏 感，对红霉素、阿米卡星、庆大霉素 ３ 种药物中度敏感，对强力霉素、四环素 ２ 种药物低度敏感。 关键词 仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验 猪大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌的某 盒、 琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒购自北京百泰克 些血清型及其毒素引起 的一种肠道传染性疾病，主 生物科技有限公司 ；Taq 酶 、dNTP、DL ２ ０００ DNA 要危害仔猪，可引起仔猪生长发育迟缓，生产性能低 Ｍarker 购自宝生物工程（大连）有限公司 ；健康昆明 下，甚至造成死亡，是目前危害仔猪生长发育的主要 系小白鼠购自 山东省实验动物 中心。 疫病之一，每年都给养猪业造成一定的经济损失[１-２] 。 １．４ 病料样品的镜检观察 该病的流行无明显季节性， 但一般在过于潮湿炎热 将采集的病料样品涂片 ，革兰 氏染色 ，镜检观察 的夏季和极其寒冷的冬季易发生， 而在温暖的春季 是否存在可疑细菌。 和秋季较少发生[３] 。 ２０１６ 年 ８ 月，连续多日降雨过 １．５ 细菌分离培养与纯化 后， 山东省滨州市某猪场饲养的 ２～３ 月龄仔猪发 将采集的病料样品分别接种于麦康凯琼脂平板 病，表现为呼吸困难 ，厌食，精神萎靡，体温升高，肝 和营养琼脂平板 ，３7 ℃培养至 ２４ h ，观察菌落特征 。 脏和肾脏坏死、有出血点，根据临床症状和剖检病理 挑取单菌落连续传代纯化至菌落大小与形态均一。 变化初步诊断为疑似大肠杆菌感染。为进一步确诊， １．６ 分离菌株的形态特征观察 本研究进行了病料样品的镜检观察、 细菌的分离与 取纯化后单菌落涂片 ，革兰 氏染色 ，镜检观察形 鉴定等实验室诊断，并对分离菌株进行了药敏试验。 态特征 。 1 材料与方法 １．7 分离菌株的生化试验 １．１ 临床病料样品的采集 取分离菌株分别接种至各种生化鉴定管， 按常 对病死猪进行解剖， 无菌采集病死猪的肝脏、 规方法测定分离菌株的生化特性。 肾脏、脾脏等病变组织，低温条件运往实验室。 １．８ 分离菌株致病性试验 １．２ 实验室检测时间与地点 取营养 肉汤中培养的分离菌株腹腔接种 ２０～２２ g 实验室检测于 ２０１６ 年 ８ 月 ２６ 日至２０１7 年 １ 月