第1章高级生物化学-氨基酸1.ppt

阴离子交换树脂洗脱顺序 + 洗脱方法：（1）改变PH值（改变离子电荷）或（2）增加离子浓度（竞争作用）.阴离子树脂：降低PH，则阳离子树脂升高PH 阴离子树脂（+）洗脱顺序：容易带正电荷早洗脱（碱性氨基酸），其次中性aa，最后酸性aa 氨基酸的洗脱 氨基酸与树脂上解离基团之间的静电引力 氨基酸与树脂基质聚苯乙烯之间的疏水作用 习题举例 （1）在PI=6时，用阳离子交换柱层析分离Lys、His和Leu的氨基酸的洗脱顺序 （2）在PI=8时，用阴离子交换柱层析分离Glu、Arg和Val的氨基酸的洗脱顺序 阳离子交换树脂洗脱顺序（aa带正电荷） 酸性aa 中性aa 碱性aa 阴离子交换树脂洗脱顺序（aa带负电荷） 先 后 先 后 碱性aa 中性aa 酸性aa （中国科技大学2002） 习题举例 有一种蛋白质水解物,在pH6时,用阳离子交换柱层析分 离,第一个被洗脱的氨基酸是( ) A. Val (pI5.96) B. Lys (pI9.74) C. Asp(pI2.77) D. Arg(pI10.76) E. Tyr (pI5.66) 用强酸型阳离子交换树脂分离下述每对氨基酸，当用pH7.0的缓冲液洗脱时，下述每对中先从柱上洗脱下来的是哪种氨基酸?  ①天冬氨酸和赖氨酸；②精氨酸和甲硫氨酸；⑧谷氨酸和缬氨酸;④甘氨酸和亮氨酸；⑤丝氨酸和丙氨酸。 习题举例 解答：用离子交换树脂分离核苷酸主要是根据它们与树脂上相反电荷的静电结合力的??不同以及核苷酸疏水的碱基环与树脂骨架之间非极性吸附力的差异。本来，用阳离子交换树 脂分离这四种核苷酸时，按照它们解离的差异，应该是AMP在CMP之前被洗脱下来。但是，由于嘌岭环比嘧啶环同交换树脂的非极性吸附力大三倍，抵消了它们之间的电荷差异，故出现上面的冼脱顺序。 思考：用阳离子交换树脂分离核苷酸时，核苷酸被洗脱的先后顺序是UMP→GMP→CMP→AMP而不是UMP→GMP→AMP→CMP。为什么? 氨基酸的疏水性质的应用 pH3.5时各核苷酸所带电荷 阴离子交换树脂柱洗脱顺序 （+） -1 -0.95 -0.46 -0.16 UMP GMP AMP CMP 实际洗脱顺序 CMP AMP UMP GMP 电荷之间作用力相似，嘌呤疏水引力大（难洗脱） UMP GMP AMP CMP 电荷 小 大 大 小 阴离子交换树脂 疏水作用 （三）、电泳 电泳（electrophoresis）：带电粒子在电场的作用下，向它所带的电荷相反方向泳动的现象称为电泳。氨基酸在pH高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。 电泳 Separation of Amino Acids With an electric current, a mixture of lysine, aspartate, and valine are separated. pH pI, 样品带正电荷，样品点向阴极移动 pH pI, 样品带负电荷，样品点向阳极移动 pH = pI, 样品不带电荷，样品点不移动 电泳 Separation of Amino Acids 分离氨基酸混合物常用纸电泳。 有一种蛋白质水解物,在pH=6时,用电泳分离,怎样控制PH值使氨基酸有效分离？点样应该点在什么位置？ （1）A. Lys (pI9.74) B. Asp(pI2.77) C. Tyr (pI5.66) （2）A. Val (pI5.96) B. Arg(pI10.76) C. Lys (pI9.74) 氨基酸电泳分离时电荷一样为什么移动距离不同？ 思 考 题 1、 有一个某种溶液中含有三种三肽：Tyr -Arg- Ser , Glu - Met - Phe 和Asp - Pro - Lys , α- COOH基团的 pKa 为3.8; α-NH3基团的pKa为8.5。在哪种pH（2.0, 6.0或13.0）下，通过电泳分离这三种多肽的效果最 好？ 答：pH=6.0 2、有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pl为4.6；5.0； 5.3；6.7；7.3。电泳时欲使其中4种泳向正极，缓冲 液的pH应该是：（D） A．5.0 B. 4.0 C. 6.0 D. 7.0 E.8.0 基本氨基酸其他分类方式 1、必需氨基酸：借一两本淡色书来 2、参与尿素合成的氨基酸： 精氨酸、天冬氨酸 基本氨基酸其他分类方式 4、 产