植物组织培养实验报告教程.doc

植 物 组 织 培 养 实 验 报 告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号： 2011192017 姓名： 李 鹏 植物组织培养实验报告 实验一 植物组织培养母液的配制 一 、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二 、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三 、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,CaCl2·2H2O ,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O Na2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇， 烟酸，蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml） ， 容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。 3、培养基配方 各种母液的吸取量 药品名称扩大倍数1L培养基吸取母液的量（mL）大量元素10100微量元素10010铁盐10010有机10010蔗糖30g琼脂0.8gPH5.8-6.3 MS培养基大量元素母液配制 化合物名称培养基浓度(mg/L)称取质量(g)NH4NO3165041.25KNO3190047.50KH2PO41704.25MS培养基微量元素母液配制 化合物名称培养基浓度(mg/L)称取质量(g)MnSO4·4H2O22.355.7ZnSO4·7H2O8.621.5H3BO36.211.5KI0.8320.75Na2MoO4·2H2O0.256.25CuSO4·5H2O0.00250.625CoCl2·6H2O0.00250.625MS培养基铁盐母液配制 化合物名称培养基浓度(mg/L)称取质量(g)FeSO4·7H2O27.86.95Na2-EDTA37.39.32 MS培养基有机物质母液的配制 化合物名称培养基浓度(mg/L)称取质量(g)肌醇1002甘氨酸20.2烟酸硫胺素0.48盐酸吡哆醇0.510烟酸0.510MS培养基钙盐和镁盐母液的配制 化合物名称培养基浓度(mg/L)称取质量(g)CaCl2·2H2O44011MgSO4·7H2O3709.25四、 实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500m