植物组织培养实验报告.doc

植物组织培养实验 课题：不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生的影响 姓 名：吴楠 学 号专业年级：生技12-1 不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生影响 摘要：本实验依次进行了培养基母液的配置、不同激素组合培养基的配置、培养基的分装与灭菌、不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生的影响。 旨在掌握不同培养基母液的配置方法、培养基的灭菌操作、超净台操作和接种的操作。通过不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生的对照实验，了解不同激素对植株再生不定芽、不定根以及生长状况的情况，探究不同激素组合的培养基对植株再生的效果。 结果证明2,4-D抑制不定芽的形成，6-BA与NAA配比越高，越有利于诱导愈伤组织的形成。 关键词: 菘蓝叶片；培养基；灭菌；无菌植株；愈伤组织；0.1%HgCI 前言：植物组织培养是指以植物组织或细胞立体操作为基础的实验性学科，又称植物离体培养。它是指在无菌和人工控制的条件下，利用适合的培养基，对植物的器官、组织、细胞或原生质体进行精细操作和培养，使其按人们的意愿生长、增殖、或者再生的一门生物技术学科。[1] 人工控制的条件指营养条件和环境条件；植物体的任伺一部分是指根、茎、叶、花、果以及它们的组织切片和细胞。植物组织培养可以在不受其他部分干扰的情况下研究被培养部分的生长和分化规律。组培实验取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。? 植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性。植物体的每个细胞都具有该物种的全部遗传信息，在离体培养条件下能经过脱分化形成胚性细胞或愈伤组织，并经过再分化发育成完整的植株个体。[2] 对培养基和器皿的彻底灭菌及正确的无菌操作是防止染菌、保证组培材料正常生长及分化的关键，是植物组织培养工作中最基本，也是最重要的技术。 1. 材料与方法 1.1 材料与试剂：菘蓝叶片 培养基 母液 1.2 方法： 1.2.1 植物器官的前处理 剪取生长正常的菘蓝叶片3-4cm，用纱布包好，置流水下冲洗20-30min。在已灭菌的超净工作台中，用75%的酒精消毒10s，无菌水水漂洗3次；再用0.1%升汞进行消毒10min，每隔1分钟轻轻震荡一次，再用无菌水漂洗4次，消毒完成后用将材料放在已消毒的无菌皿上待用。[3] 1.2.2培养基的制备 1.2.2.1 母液的配制与保存 （1）实验试剂 NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,CaCl2·2H2O ,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O Na2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2O，CuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸、蒸馏水。 （2）实验用品 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。 （3）不同培养基配置[4] 表1 MS培养基大量元素母液的配置 序号 培养基 扩大倍数 母液 成分 浓度（mg/L） 称量 体积（L） 浓度（mg/L） 1 NH4NO3 1650 10 16500 1 16500 2 KNO3 1900 10 19000 1 19000 3 CaCl2·2H2O 440 10 4400 1 4400 4 MgSO4·7H2O 370 10 3700 1 3700 5 KH2PO4 170 10 1700 1 1700 表2 MS培养基微量元素母液的配置 序号 培养基 扩大倍数 母液 成分 浓度（mg/L） 称量 体积（L） 浓度（mg/L） 6 MnSO4·4H2O 22.3 100 446 0.2 16500 7 ZnSO4·7H2O 8.6 100 172 0.2 19000 8 H3BO3 6.2 100 124 0.2 4400 9 KI 0.83 1000 16.6 0.2 3700 10 Na2MoO4·2H2O 0.25 1000 5 0.2 1700 11 CuSO4·5H2O 0.025 1000 5 0.2 3700 12 CoCl2·6H2O 0.025 1000 5 0.2 1700 表3 MS培养基铁盐母液的配置 序号 培养基 扩大倍数 母液 成分 浓度（mg/L） 称量 体积（L） 浓度（mg/L） 13 N