沈萍版微生物第二章.pdf

第二章 微生物的纯培养和 显微技术 计划课时：4 • 微生物的分离和纯培养（重点） • 显微镜和显微技术（了解） • 显微镜下的微生物（自学） 微生物的分离和纯培养 显微镜和显微技术 培养物(culture)：在微生物学中，在认为规定的条件下培养、 繁殖得到的微生物群体 纯培养物(pure culture) ：只有一种微生物的培养物 Colony lawn 第一节 微生物的分离和纯培养 一、培养基（culture medium)的概念及配制原则 培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生 代谢产物的营养基质 配制原则 营养成分 C源 N源 无机盐 生长因子 水 营养成分应该保持一定的比例 控制适当的条件 PH 离子浓度等 真菌的培养基常保持在pH 4.5~6.0 细菌的培养基常保持在pH 7.0~7.5 二、培养基的类型及应用 1. 按物理状态划分 1.1 固体培养基 常用的凝固剂：琼脂（96 ）、 明胶（25 ） 用于分离鉴定、记数菌种保藏 1.2 半固体培养基 琼脂含量为0.2%~0.17% 主要用于观察微生物的运动特征,分类鉴定 及噬菌体的效价滴定等 1.3 液体培养基 常用于大规模的工业生产 2.按用途划分 2.1 基础培养基（minimum medium) 牛肉膏蛋白胨培养基 2.2 加富培养基（enrichment medium ） 又称营养培养基=基础培养基+特殊成分 作用：富集和分离某种微生物 2.3 选择培养基（selective medium ） Type I 依据某些微生物的特殊营养需求 利用缺乏N源的培养基分离固氮微生物 利用以石蜡油作为唯一C源的培养基来分离能 分解石蜡油的微生物 Type II 加入抑制或者杀死其他微生物的物质 真菌的分离 培养基中加入抗生素抑制细菌和放线菌 放线菌的分离 培养基中加入10%的酚抑制细菌和真菌的生长 G-细菌的分离 培养基中加入亮绿或结晶紫可以抑制G+细菌的生长 2.4 鉴别培养基 主要用于微生物的快速分离鉴定以及分离和筛选 产生某种代谢产物的微生物菌种 明胶培养基 淀粉培养基 问题 加富培养基和选择性培养基在微生物分离中作用的异同？ 按照成分的不同来分 天然培养基（natural medium ） 牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g ，蛋白胨10g，NaCl 5g， 琼脂20g，水1000ml） 合成培养基（synthetic medium ） 查氏培养基 (NaNO 2g, K HPO 1g,KCl 0.5g, MgSO 0.5g, 蔗糖30g， 3 2 4 4 水1000ml) 三、无菌技术（aseptic technique) 三、无菌技术（aseptic technique) 分离、转接及培养纯培养物时防止其他微生物 污染的技术 1.微生物常用器皿的灭菌 灭菌和消毒 培养容器（试管、培养皿、三角瓶、烧瓶） 160℃~170 ℃ 2小时 干热灭菌 一般培养基 2