生物化学和分子生物学实验指导.pdf

生物化学与分子生物学 实验技术 南农业大学植物科学实验教学中心 2007 年4 月 目录 实验一 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）3 实验二 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白6 实验三 水稻种子中蛋白质和淀粉含量的测定8 实验四 水稻萌发及幼苗期淀粉酶和过氧化氢酶活性测定 14 实验五 植物组织中氨基转移反应及氨基酸的层析分离 19 实验六 不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的比较分析21 实验七 用SDS ―聚丙烯酰凝胶电泳法测定蛋白质的分子量24 实验八 植物基因组DNA 的提取及含量纯度检测27 2 实验一 植物体内可溶性糖含量的测定 （蒽酮法） 、目的： 糖 物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和 贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖 的含量。 因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高 低。 二、原理 糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下： HO—CH—CH—OH CH—CH | | 浓H SO || || 2 4 H—CH CH—CHO CH C—CHO + 3H O 2 | | △ OH OH O 戊糖 糠醛 — — — — HO CH CH OH CH CH | | 浓H SO || || 2 4 HO—CH —CH CH—CHO HO—CH —C C—CHO + 3H O 2 2 2 | | △ OH OH O 已糖 羟甲基糠醛 糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区 620nm 波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关 系。 此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵 度高，简便快捷， 适用于微量样品的测定等优点。 三、实验材料、仪器及试剂 1．材料：白菜叶、柑桔 2 ．仪器：分光光度计 恒温水箱 20ml 具塞刻度试管 （3 支）漏斗 100ml 容量瓶 刻度试管 试管架 剪刀 研钵 3 3 ．试剂： （1）200 μg/ml 标准葡萄糖：AR 级葡萄糖 100mg ，蒸馏水溶解，定容至 500ml 。 （2 ）蒽酮试剂：1