检测技术及梅毒实验室检测技术全解.ppt

第四代试剂联合检测HIV P24抗原和抗HIV 抗体 艾滋病实验室生物安全 生物安全细则 职业暴露的防范 梅毒实验室检测技术 广州医科大学附属第五医院检验科 詹铀超 主要内容 实验室检测注意事项及临床意义 梅毒实验室检测策略探讨 常用梅毒实验室检测方法 病原学检测 血清学检测 病原学检查 原理： 一期、二期梅毒时 ，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。 方法：（1）暗视显微镜检查 ? （ 2）镀银染色法 （ 3）核酸检测（血液标本？） 注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功， 仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。 梅毒血清学检测方法 1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体） (2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）。 未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。 非梅毒螺旋体抗原血清学原理 方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（ TRUST ） （3）性病研究实验室试验 (VDRL) 等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 1 、仪器：水平旋转仪，转速100r/min，转幅约18mm 2、定性试验 加样：吸取0.05mL血清( 浆) 放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内 加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1 滴抗原（ 60滴/mL，1滴=17ul ） 反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ - 29 ℃）亮光下观察结果。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 3、定量试验 稀释夜准备：在反应纸板圈内 加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性实验。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 一期梅毒 1 年后转为阴性 二期梅毒 2 年后转为阴性。 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50% 病人血清反应仍为阳性。 非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。 因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 假阳性反应 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可排除。 生物学假阳性反应 ( 一般滴度小1:8），应采用梅毒螺旋体抗原血清学试验 如TPPA等进行排除。 梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后 ，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。 梅毒螺旋体抗原血清学试验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ ELISA） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫层析法- 梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS ） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（ WB ） TPPA TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。 TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。 TPPA试验原理示意图 TPPA 试验结果判读 梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据) 主要内容 实验室检测注意事项及临床意义 梅毒实验室检测策略探讨 梅毒实验室检测策略思考 规范化梅毒实验室检测要求 根据目的选择检测方法及检测策略。 可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。 谢谢！ * * 艾滋病检测技术 广州医科大学附属第五医院检验科 詹铀超 窗口期 HIV感染后的血清学动态 Anti-P24 HIV RNA 感染 1周 2周 3周 4周………………1年 2年 3年………..1 0年……….. 急性期 潜伏期 Anti-gp41/120 (anti-gp36) Ag 艾滋病期 Ab 浓度 试验室假阴性报告的原因分