荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸.doc

PAGE 2 - 实验编号 CA393010 实 验 指 导 书 实验项目： 荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸 所属课程: 实验化学3-2 课程代码: CA393 面向专业: 化学 学院(系): 化学化工学院 实 验 室: 基础化学实验中心 代号: 11101 2007 年 2 月 18 日 实验目的 1、掌握用荧光法测定药物中乙酰水杨酸（ASA）和水杨酸（SA）的方法。 2、了解Cary Eclipse型荧光光谱仪的基本操作。　 实验内容 　1、ASA和SA贮备溶液的配制 （1）ASA贮备液的配制：称取0.4000g乙酰水杨酸溶于1％醋酸-氯仿溶液中，用 1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用； （2）SA贮备液的配制：称取0.750g水杨酸溶于1％醋酸—氯仿溶液中，用 1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用。 2、ASA和SA激发光谱和荧光光谱的绘制 将ASA和SA贮备液分别稀释100倍(分二次完成，每次稀释10倍)。用得到的溶液分别扫描ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别确定它们的最大激发波长和最大发射波长。 3、标准曲线的制作 (1) ASA标准曲线的制作 用移液管分别准确移取浓度为4.00 μg·mL-1的ASA溶液2、4、6、8、10 mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度. (2) SA标准曲线的制作 用移液管分别准确移取浓度为7.5μg·mL-1 的SA溶液2、4、6、8、l0mL至5只50mL容量瓶中，用 1％醋酸—氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度． 4、阿斯匹林药片中乙酰水杨酸和水杨酸的测定 取5片阿司匹林药片磨成粉末，准确称取0.40mg用1％醋酸—氯仿溶液溶解，全部转移至100mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀释至刻度。迅速通过定量滤纸干过滤，用该滤液在与标准溶液同样的测定条件下测量SA荧光强度。 将上述滤液稀释1000倍(用三次稀释来完成)，在与标准溶液同样的测定条件下测量ASA荧光强度。 实验示意图 用于测量荧光的仪器通常都由光源、单色器、样品池、检测器等几部分组成。光路系统示意图见图。由光源发出的光，经第一单色器（激发光单色器）后，得到所需要的激发光波长。若其强度为I0，通过样品池后，由于一部分光线被荧光物质所吸收，故其透射强度减为It。荧光物质被激发后，将发射荧光，为消除入射光和散射光的影响，荧光的测量应在与激发光成直角的方向进行。仪器中的第二单色器称为荧光单色器，其作用是消除溶液中可能共存的其它光线的干扰。荧光作用于检测器上，得到相应的电信号，经放大后，再用适当的记录器记录。 实验用主要仪器设备、消耗品 仪器设备名称 规格 消耗品名称 规格 CaryEclipse荧光光谱仪 乙酰水杨酸 电子天平 水杨酸 台秤 醋酸 容量瓶 氯仿 实验原理及原始计算数据、所应用的公式 室温下，多数分子处在基态的最低振动能级，而基态分子中偶数电子成对地存在于各个分子轨道中，根据Pauli不相容原理，分子中同一轨道所占据的两个电子必须具有相反的自旋方向，所以电子净自旋等于零（s=0），分子的多重态M=2s+1=1(M 为磁量子数)，这种电子称单重态，用S0表示。分子吸收能量后，若电子在跃迁过程中不发生自旋方向的变化，这时分子处于激发的单重态，第一、第二激发单重态分别以S1、S2表示。如果电子在跃迁过程中还伴随自旋方向的改变，这时分子便具有两个自旋不配对的电子，即s=1，分子的多重度M=3，处于激发的三重态，以T1、T2表示。按照洪特规则，处于分立轨道上的非成对电子，平行自旋要比成对自旋更稳定，所以三重态能级总是比相应的单重态能级稍低（图3-3-5）。处于激发态的分子，可以通过无辐射的方式去活，将多余的能量转移给其它分子或经激发态分子内部的振动或转动能级的内部转换后，回到第一激发单重态的最低振动能级，然后再以发射辐射的方式去活，跃迁回至基态各振动能级，发射出荧光。当第一激发态单重态和三重态之间发生振动耦合，则可以无辐射方式去活，回至最低三重态，然后以发射辐射的方式去活，跃迁回至基态时，便发射出磷光 激发光谱与荧光光谱 图3-3-6分子吸收和发射过程的能级图由于荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以根据它们的激发光谱曲线来确定