功课4尿中核黄素的测定(荧光法).doc

运动营养学实验报告 姓名：________ 学号：_____ 日期：________ 实验名称 尿中核黄素的测定 实验目的 掌握荧光法测试尿中核黄素的方法和意义 实验原理 含有核黄素的溶液在紫外线下发黄绿色荧光，在稀溶液中荧光强度与核黄素浓度成正比。核黄素可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。 主要仪器 和试剂 仪器：970型荧光分光光度计、500ml烧杯、500ml量筒、镜头纸、加样枪、试管、药匙、 试剂：1. 酸性水：取浓硫酸0.3ml，加蒸馏水至200ml 2. 核黄素标准储备液：准确称取25mg核黄素，溶于1000ml容量瓶中，用酸性水稀释到刻度，移入棕色试剂瓶中，储存在4℃冰箱中。 3. 核黄素标准工作液：取4.0ml核黄素标准储备液上清，用酸性水稀释到100ml，移入棕色瓶中，用时现配。 4. 低亚硫酸钠 实 验 主 要 步 骤 1. 样品：取尿样1.0ml，加酸性水19ml于一具塞试管内，混匀，在激发波长420nm和发射波长530nm处测定荧光强度，记下读数A。然后取30mg低亚硫酸钠直接加入比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度，记下读数B。 2. 内标准：取尿样1.0ml加核黄素标准应用液1.5ml，加酸性水17.5ml，混匀，在同样情况下测定荧光强度，记下读数C。取30mg低亚硫酸钠直接加入比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度，记下读数D。 实验结果 尿中核黄素含量=[-445.493-(-546.744)]/[-144.711-(-543.011)]×15×155=591μg 分析与讨论 由于对仪器使用不是很熟悉，蒸馏过程中出现暂停现象。 2、因为有样品的对照滴定时估测到所需滴定的量，使操作变得简便。 结论 受试者尿中核黄素含量为591ug 备注：受试者姓名： 性别： 尿液是否稀释：否 课后思考题 1. 维生素B2的测试过程中有哪些注意事项？为什么？ 答：1. 由于核黄素余光分解，整个操作应在避光实验室中进行。 2. 做内标准的目的是去除尿中可能存在的有荧光的物质。 3. 使用荧光剂时应用荧光红纳校正。 荧光红纳溶液的配制：溶解25.0mg荧光红钠于少量水中，搅拌使其溶解后加水至250ml，此为储备液。取0.25ml加水稀释成250ml，此为工作液。 校正步骤：先选择所需激发波长和发射波长，校正仪器零点，然后用荧光红钠工作也校正荧光计，使指针在某一刻度，再测定样品的荧光强度。 2. 营养和运动对机体维生素B2的影响都有哪些？ 答：机体对维生素B2的需求似乎同能量的消耗或肌肉活动有关。维生素B2缺乏主要发生在素食主义者身上。如果膳食里未含奶类食品或其他动物脂肪的话，那么机体就有可能缺少维生素B2。 维生素B2与机体的有氧代谢能力关系密切。运动会导致机体对维生素B2的需求量增加，尤其是生长发育期的儿童少年、控体重、减体重以及素食或不吃动物蛋白的运动者，更要注意的是维生素B2的营养状况。核黄素主要存在于动物内脏中（如肝、肾、心等），牛奶及蛋类含核黄素也较多，坚果类食品（如核桃、栗子、松子、花生、瓜子等）含量也不错。若缺乏维生素B2，可适量补充以上食物。 3. 为何加入低亚硫酸钠？ 答：核黄素可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。