荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析(共7篇).doc

荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析(共7篇) 实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量 实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量 【实验题目】 荧光分光光度法测定维生素B2的含量 【实验目的】 1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。 2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。 【实验原理】 维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为： 由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此 它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有 机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳 定。 维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿 色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH＝6~7的 溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液 浓度呈??性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的 含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而 转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的 物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。 在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc 这是荧光光语法定量分析的依据。 【主要仪器与试剂】 主要仪器：F-2500 HiTachi荧光分光光度计；1cm石英皿；50mL容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管 试剂：维生素B2标准溶液：未知液4 【实验内容及步骤】 1、系列标准溶液的制备 取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。待测。 2、待测液制备 取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中，加入去离子水稀释至刻度，摇匀。待测。 3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制 设置λem＝540nm为发射波长，在250~500nm范围内扫描标准溶液③，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。从激发光谱图上找出其最大激发波长λex。在此激发波长下，在400~600nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长λem。 4、标准溶液及样品的荧光测定 将激发波长固定在最大激发波长λex，荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处λem。扫描蒸馏水和上述5个标准液的荧光发射强度。数据记录于表1中。以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，制作标准曲线。 在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度，计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。 【数据记录与结果分析】 ①、维生素B2激发光谱图： 最大激发波长λex=373nm ②、维生素B2荧光发射光谱图： 最大荧光发射波长处λem=524nm ③表1：标准溶液及待测溶液的浓度和荧光强度数据记录： ④、系列标准溶液浓度与荧光发射强度的标准曲线图： 由计算机处理得标准曲线方程为 y=112.49x-1.7769 相关系数r= 则待测溶液的浓度c =0.907μg/mL 【问题讨论】 1、试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因？ 答：原因是由于现代电子技术具有检测十分微弱光信号的能力，并且荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度也可以增大荧光强度，使测定的灵敏度提高；而吸收光度法测定的是吸光度，不管是增大入射光强度，还是提高检测器的灵敏度，都会使透射光信号与入射光信号以同样的比例增大，吸光度值不会改变，因此灵敏度不能提高。 2、维生素B2在pH=6~7时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？ 答：因为维生素B2在碱性溶液中经光线照射，会发生分解而转化为光黄素，后者的荧光比维生素B2的荧光强的多。因此，测量时溶液要控制在酸性范围内进行。 篇二：荧光分光光度法测定维生素B2的含量 华南师范大学实验报告 课程名称： 仪器分析实验 实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2 的含量 荧光分光光度法测定维生素B2的含量 一、实验目的 1．掌握荧光物质的标准曲线法定量测量含量的操作方法和原理； 2．了解分子荧光光谱定量分析与定性分析的特点及区别； 3．熟悉荧光光度计定量法测量软件的数据处理。 二、实验原理 含有荧光基团的化学物质，其分子吸收了辐射能成为激发态分子，再从激发态返回基态时发射光的波长比吸收的入射光