实验九荧光光度法测定样品中维生素B2的含量.doc
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实验六 荧光光度法测定样品中维生素B2的含量
一、目的与要求
1. 掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理;
2. 加深对荧光光度法原理的理解;
3. 巩固荧光光度计的基本操作。
二、方法原理
维生素B2又称核黄素,溶于水,在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质,在中性和酸性溶液中,对热稳定,在碱性溶液中较易被破坏。维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。在稀溶液中,其荧光强度与浓度成正比,即:
F = Kc
故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。
三、仪器与试剂
1.930型荧光光度计及其附件。
2.容量瓶:25 mL。
3.维生素B2标准贮备液(100 mg·L-1):准确称取25mg维生素B2,用ω为0.05的乙酸溶解,转移至250 mL容量瓶中,用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度,摇匀,保存于冰箱中。
4.维生素B2标准工作液(0.5mg·L-l):吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中,用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度,摇匀,随用随配。
5.含维生素B2的水样(自行制备):取VB2片剂一片,用ω为0.05的乙酸溶液溶解(若有不溶杂质,过滤即可),稀释适当倍数后测量。
四、内容与步骤
1.标准系列溶液的配制
吸取维生素B2标准工作液0,0.50,1.00,2.00,3.00和4.00 mL,分别加入6个25 mL容量瓶中,用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度,摇匀。
2.样品的准备
吸取含维生素B2的水样5.00 mL于25 mL容量瓶中,用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度,摇匀。
3.标准系列与样品溶液的测定
按仪器的使用方法准备好仪器(仪器操作流程如下)。待仪器稳定后,以360 nm或400 nm为激发波长,以550 nm为荧光发射波长,用1 cm荧光皿及ω为0.05的乙酸溶液作参比(凋荧光强度为“0”),用标准系列溶液中最高浓度的溶液调节其荧光强度为“100”,分别测定其他标准系列溶液和样品溶液的荧光强度。
仪器操作流程如下:
标准系列溶液的测定:
测样:
五、数据记录与处理
1.列表记录各项实验数据。
2.以荧光强度为纵坐标,标准系列溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。
3.根据样品溶液的荧光强度,在标准曲线上查得对应的浓度Cx,,依下式计算水样中维生素B2的含量:
水中维生素B2含量(rng·L-l)=Cx×稀释倍数
六、问题与讨论
1.激发波长与荧光波长有何关系?为什么?
2.测定过程中应注意哪些问题?
双击FL Winlab
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Concentration
References
输入浓度单位(concentration units)
clear
选择添加(add)或消除(remove)样品号
依次输入相应浓度值
测量背景(measure background)
鼠标放在相应样品号上,按measure 测量
单击samples
添加(add)或消除(remove)试样号
放入背景,点击background
按绿灯
在对话框中点击“是”
点击measure
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