动物组织中DNA提取方法的优化.pdf
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2009年第2期(总第72期) 中国现代黼装备
动物组织中DNA提取方法的优化·
沈剑敏 周桂花
兰州大学 甘肃兰州 730000
摘要:为了提高生物化学实验的教学效率,对脱氧核糖核酸几种提取方法中的几个关键步骤作了定性定
量分析,对鏊个流程加以优化,简化了操作步骤,缩短了实验时间,经过几年的实践,已成功运用于该校
本科生生物化学实验教学环节,取得了良好的教学效果。
关键词:动物组织DNA蛋白质变性剂提取
由于招生规模的扩大,目前学生人数已是十几年前 编著的《生物化学实验原理和方法》[1]一书,其中的
的两倍甚至更多,为了保质保量打好基础,往往要求学 “猪脾脏DNA提取与二苯胺测定法”是必做实验。尽管
生单人单组进行操作。另外,为了培养学生自主创新能 该DNA提取方法较为成熟,但材料用量大,来源相对困
力,教学计划中增加了综合和创新实验的课时比例,减 难,还需冰箱内过夜,提取时间太长,而且提取过程稍
少了基础实验的课时比例,但是教学内容几乎没有减 有不慎很容易失败,所以笔者结合李如亮主编的《生物
少,这给基础课实验教学提出了更高的要求。 化学实验》[z]和陈钧辉主编的《生物化学实验》【¨,
生物化学实验中脱氧核糖核酸的提取是许多高校生 从选择合适的提取材料入手,比较了几种DNA提取方法
物学科学生必做的实验。其主要的方法一般采用苯酚 的优缺点,优化组合成了一种操作简便、省时、无需昂
法、氯仿法和去污剂法[1],或者是这几种方法的组 贵药品的新方法。
合,其主要思路是两条:第一,利用核蛋白在不同浓度
一、优化后的实验流程
的盐溶液中溶解度的不同,将RNA核蛋白与DNA核蛋白分
开;第二,利用有机溶剂,并辅以其他物理作用使蛋白 1.取新鲜的动物组织(一般为肝脏或脾脏)5克,
NaC卜0.015mol/L柠
质变性,形成凝胶,与核酸分开。此外,在整个提取过 剔去结缔组织,用0.15mol/L
程中,为了避免DNA被降解破坏,要防止过酸和过碱等 檬酸钠溶液洗去血水,剪碎并研磨。
化学因素、高温和机械力等物理因素以及核酸降解酶的 2.用40raL0.15mol/L
作用。 一 钠溶液将肝糜转移至离心管,3000r.P.m离,blain。
自1996年以来,我校一直采用北京大学李建武等 3.弃去上清夜,收集沉淀,重复第②步,再弃去
上清液(重复洗涤可使RNA核蛋白与DNA核蛋白尽可能分
008-1 开,又可以脱去血色素,使产品洁净)。
收稿日期:2 1—04
NaCl—
作者简介:沈剑敏,硕士,高级实验师。 4.沉淀物悬子25mLpH8.0的0.15mol/L
· 本文系国家基础科学人才培养基金项目 0.1mol/LEDTA中。
0030053).
(j 5.缓慢滴加lo%SDS溶液3mL,边加边搅。
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fME导孑喇倒磊翮彤@P缎俐∥ 7口。
V
万方数据
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6.60。C恒温水浴保温10min,不断搅动,溶液变 在以上流程的第①~④步中依次使用,可得到较好的实
为粘稠并略有透明。
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