三种方法对肉松中胆固醇含量测定及比较.doc

三种方法对肉松中胆固醇含量的测定及比较 　　摘要：采用直接皂化方法对样品进行前处理，用乙醚和石油醚混合液（1∶1）萃取，用气相色谱、液相色谱和比色法分别进行检测。气相、液相色谱法在25～500 mg/L范围内具良好的线性关系（R20.999），比色法在0～42 mg/L范围内具良好的线性关系（R20.997）。液相、气相色谱和比色法3个加标浓度平均回收率分别为105.5%、100.1%和102.3%，检出限分别为0.1、0.4和2.1 mg/100 g，对肉松中胆固醇含量测得值分别为52.2、51.2和102 mg/100 g。3种方法均很好地满足方法学要求，其中比色法体现总固醇类化合物的含量；气相色谱法和液相色谱法专属性更强、灵敏度更高，能更准确地反应样品中胆固醇含量。 　　关键词：胆固醇；肉松；气相色谱法；液相色谱法；比色法 　　中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）05-0942-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.05.038 　　Determination of Cholesterol Contents in Dried Meat Floss 　　and Comparison of 3 Different Methods 　　ZHU Bing-qi， LIU Zhu， CHEN Wan-qin， LUO Jin-wen 　　（Zhejiang Institute for Food and Drug Control， Hangzhou 310000， China） 　　胆固醇在人体内起着广泛的生理作用，是动物细胞中不可缺少的重要物质，其不仅仅是细胞膜的组成物质，也是胆汁酸、维生素D和甾体激素的原料[1]。胆固醇主要来源为两个，其中80%是人体自身合成，其次20%是从食物中获取。世界卫生组织（WHO）和联合国粮食与农业组织（FAO）将300 mg设置为成年人每日最大建议摄入量[2]。尽管并没有充足的数据来揭示从食物中过量摄入胆固醇与动脉粥样硬化和冠心病等心血管疾病之间的直接关系[3]，但大量研究表明两者之间存在相关性[4，5]，高水平的低密度胆固醇提高了心血管疾病的风险[6]，因此在相关领域这一直是一个重要的课题[1]。 　　在针对胆固醇的化学检测分析手段中，主要使用了比色法、荧光发光法、液相色谱法和气相色谱法等[1，2]。其中气相色谱法和液相色谱法能够将胆固醇分离并进行定量分析，因此较为常用[7]。通常固醇类物质在190～210 nm处有吸收，因此在液相方法中常使用紫外检测器；气相色谱柱分离性好、灵敏度高，通常配备FID或质谱检测器[2，5]。比色法利用固醇类与酸作用时脱水聚合产生颜色物质以进行定量分析[8]。在国家标准中，规定了高效液相色谱法GB/T 22220-2008，肉与肉制品中胆固醇含量测定GB/T 9695.24-2008和食品中胆固醇的测定GB/T 5009.128-2003为法定方法对胆固醇进行检测，但鲜有报道将上述3种方法同时进行比较。 　　本试验通过直接皂化法处理样品，利用比色法、高效液相色谱法和气相色谱法3种方法分别测定肉松中胆固醇的含量，进行方法学验证，比较3种方法的优缺点，为实验室开展胆固醇的检测提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　肉松；鱿鱼；胆固醇（纯度≥95%，德国Dr. Ehrenstorfer GmbH公司）；甲醇、无水乙醇（色谱纯，德国Merck公司）；石油醚（沸程30～60 ℃）；无水乙醚；无水硫酸钠；氢氧化钾。以上试剂如无特别说明均为分析纯，试验用水为Millipore超纯水。 　　1.2 仪器设备 　　天平（Mettler XPE205，美国Mettler Toledo公司）；气相色谱仪（7890B，FID检测器，美国Agilent公司）；液相色谱仪（1260，DAD检测器，美国Agilent公司）；紫外可见分光光度仪（Lambda 35，美国Perkin Elmer公司）；旋转蒸发仪（RV10，德国IKA公司）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 ?悠反?理 胆固醇样品皂化：将样品粉碎混匀，精密称取固体样品于具塞锥形瓶中，加入30 mL无水乙醇，超声5 min，加入60% 氢氧化钾溶液10 mL，置于80 ℃ 恒温水浴中皂化20 min，取出超声5 min，继续放回80 ℃水浴中皂化20 min，取出摇匀、冷却至室温。 　　胆固醇提取：将皂化液全部转移至250 mL分液漏斗中，用30 mL水分2～3次冲洗具塞锥形瓶，冲洗液并入分液漏斗，再用50 mL石油醚和乙醚混合液（1∶1）分2～3次冲洗锥形瓶并入分液漏斗中，振摇提