第三章蛋白质化的学[二].ppt

（ＨＣl中） ＤＮＰ－多肽 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (2) （DNS法）丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)反应 -HCl + 氨基酸混合物 水解 多肽 多肽 DNS-氨基酸 具有荧光 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (3)Edman法（异硫氰酸苯脂反应） PITC 无N-端氨基的剩余部分 用层析法分离 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (4) 氨肽酶法 从多肽链的N末端依次向内切 NH2 ---aa---aa---aa---aa……. 据一定时间内释放出的AA的数量和种类来推测. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. C-未端的测定方法 1.肼解法 是目前最好的方法 用色谱法鉴定 多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 注:末端若为半胱氨酸、天冬酰胺、精氨酸在肼解过程中易被破坏。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. CH C R1 H2N O … CH C R（n-1） O H2N CH COOH Rn NHNH2 H2N + + + NHNH2 CH C R1 H2N O N H … CH C R（n-1） O N H C O N H CH COOH Rn NH2NH2 无水 100℃ （n-1）个氨基酸酰肼 C-末端氨基酸 氨基酸酰肼可与苯甲醛反应生成沉淀，与C-末端氨基酸分离 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3.LiBH4还原法 多肽+ LiBH4 水解 α-氨基醇+ n氨基酸 含C—端氨基酸,用层析法鉴定 2. 羧肽酶的方法 是目前最有效也是最常用的方法。 羧肽酶是一类肽链外切酶，它专一地从肽链的C－端依次切下一个氨基酸残基，释放出游离的氨基酸。据一定时间内切下的数量来测氨基酸的数量。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酶解法：如胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 化学法：如溴化氰法 羟胺法 5、裂解多肽链成较小的片段 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 胰蛋白酶 R1=Lys和Arg侧链(即Lys和Arg的羧基参与形成的肽键)（专一性较强，水解速度快）。 R2=Pro时抑制水解 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 糜蛋白酶 或称胰凝乳蛋白酶： R1=Phe,Trp,Tyr时水解快; R1= Leu，Met和His水解稍慢。 R2