脲酶活性的测定课件.ppt

实验三大豆制品中脲酶活性的测定 * 脲酶测定 ● Department of Animal science 动物营养与饲料学 * 2010.10.30 一、实验目的 1、掌握大豆制品中脲酶活性的测定原理 2、熟悉掌握用PH增值法测定大豆制品中脲酶活性 二、 测定原理 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30分钟，尿素酶催化尿素水解产生氨，由于尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液PH值升高，试样溶液与空白溶液的PH值之差，即可间接表示出氨量的多少。 NH2CONH2+ 尿素酶 2NH3 ↑ + CO2 三、仪器及试剂 1、仪器 分析天平、样品粉碎机、样品分析筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等 0.05mol/L磷酸盐缓冲液、尿素缓冲溶液等 2、试剂 四、试样的选取和制备 选取具有代表性的试样，粉碎至40目，用“四分法”缩减至200～300g，密闭保存，以防试样组分变化或变质。 五、测定步骤 1、样品试验： 准确称取0.200±0.001g样品于称量瓶中，加入10ml尿素缓冲溶液，加塞混合，然后置于30℃水浴中，在混合操作时称量瓶切勿倒置。 2、空白试验： 准确称取0.200±0.001g样品于称量瓶中，加入10ml0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液，加塞混合，置于30℃水浴中。 3、样品试验与空白试验的制备应相隔5分钟，并且每隔5分钟搅拌内容物一次。 4、30分钟后，相隔5分钟将样品与空白试验的称量瓶从水浴中取出，将上层液体移入5ml烧杯中，在从水浴中取出刚达5分钟时，分别测定此种上层液体的PH值。 1、计算公式： 六、结果的计算 样品试验的PH值与空白试验的PH值两者之间的差异，则为脲酶活性的指数，即： 脲酶活性 = 试样的PH测定值-空白的PH测定值 每个样品应取两个平行样测定，以其算术平均值为结果。 2、重复性： 七、注意事项 1、关于酸度计的使用 BACK 2、称量瓶应塞紧 3、关于固定质量称量法 4、通常： 0.02△PH≤0.3 加工适度 △PH0.02 加工过度 △PH0.3 加工不够 * 脲酶测定 ● Department of Animal science 动物营养与饲料学