骨髓源性血管内皮祖细胞的分离培养及鉴定.pdf

· 76 · 沈阳医学院学报 JournalofShenyangMedicalCollege 第 15卷 第2期 2013年6月 骨髓源性血管内皮祖细胞的分离培养及鉴定 韩莹 ，施鹏 ，王奕丹 ，闰青爽 ，韩清 ，吴皤 ，张玲 (1．沈阳医学院基础医学院病理教研室，辽宁 沈阳 110034；2．沈阳医学院奉天医院妇科；3．沈阳医院基础医院2011级临床医学专业 4班；4．沈阳市文官屯95979部队卫生教研室) [摘要]目的：探索大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞 (endothelialprogenitorcells，EPCs)的培养、诱导分化及鉴定方法。方 法：取大鼠股骨并冲洗骨髓腔，梯度密度离心法获单个核细胞后内皮细胞培养液培养，通过细胞形态、免疫组化和免疫荧 光检测CD34、vwF、CD133、VSF，以及摄取 DiL—aeLDL的能力进行鉴定。结果：新分离的骨髓单个核细胞呈圆形，2d后 细胞贴壁，呈梭形或纺锤形，7d呈集落或线状排列，10d接近融合，呈鹅 卵石样排列；贴壁 细胞 CD34、ⅧF、vWF、 CD133均表达阳性，能摄取 Dil．acLDL并结合FITC—Lectin—UEA-1。结论：从大鼠骨髓中分离出EPCs，并初步建立了骨髓源 性EPCs分离培养、诱导分化及鉴定方法。 [关键词]骨髓；内皮祖细胞；鉴定 [中图分类号]R361．2 [文献标识码]A [文章编号]1008—2344(2013)02—0076—04 doi：10．3969／j．issn．1008—2344．2013．02．004 Isolation，CultureandIdentificationofBoneM arrow DerivedEndothelialProgenitorCells HANYing，SHIPeng，WANGYidan，YANQingshuang，HANQing，WUFan，ZHANGLing (1．DepartmentofPathology，ShenyangMedicalCollege，Shenyang110034，China；2．DepartmentofGynecoloyg ，FengtianHospitalAffiliatedto ShenyangMedicalCollege；3．Class4Grade2001，ShenyangMedicalCollege；4．DepatmentofHygiene，Army95979ofWenguantunofShenyang) [Abstract]Objective：Toexploretheratbonemarrowderivedendothelialprogenitorcells(EPCs)，culture，differentiationand identificationmethod．M ethods：Themarrow cavityofratfemurwasrinsed，singlenuclearceilswasobtainedbydensitygradient centrifugation，thoseendothelial cellswerecultured，thecellmorphologywasobserved．CD34，vWF，CD133weredetectedwithim— munohistoehemistryandimmunofluorescenee，absorbedDiL—acLDL andcombinedwithFITC Lectin-UEA一1，uhrastructureandchro- mosomekaryotypeanalysisforidentification．Results：Thenew separationofbonemarrow mononuclearcellsandrounded．After somecellsbegantostickwall，aspindleorirregularshape，7dshowcellcolonyorlineararrnagement，10dc]osetoconvergence，a typicalcobblestoneappearance．Adherentcells，CD34，vWF，CD133positiveexpressionnadshowsdynamicchanges，couldabsorb DilacLDLandcombinedwithFITC LectinUEA．1．Conclusion：Thisexperimentpreliminarilyestablisheda