人胚胎主动脉血管内皮祖细胞的分离培养及鉴定-中国医药生物技术.PDF

中国医药生物技术 2012 年 4 月第 7 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2012, Vol. 7, No. 2 85 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.02.001 ·论著· 人胚胎主动脉血管内皮祖细胞的分离、 培养及鉴定 庄乾淑，张文健，叶丽亚，刘虹麟，曹妍婷，成兰云，丁浩， 娄晋宁，刘鹏，李建中 【摘要】 的形成和侧支循环的建立[5] 。因此，EPCs 在心肌 目的 研究人胚胎血管内皮祖细胞（EPCs ）分离、扩增及 梗死、动脉粥样硬化和糖尿病血管并发症等疾病的 鉴定的方法，并评价其分化成血管内皮细胞的能力，为人胚 防治作用中受到越来越多的关注。应用 EPCs 细胞 胎血管来源 EPCs 作为干细胞技术治疗疾病的细胞材料提 修复血管内皮细胞的损伤或促进缺血区新生血管 供依据。 的形成可能成为未来干细胞临床治疗的一种新技 方法 从 14 周龄流产人胚胎主动脉中应用胶原酶消化法 术。然而，目前通过密度梯度离心法或免疫磁珠分 分离获得 EPCs ，用含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生 选等方法从骨髓、外周血和脐血中分离获得的 长因子和白血病抑制因子的低血清培养基体外扩增培养 EPCs 非常有限[6-8]，难以满足临床 EPCs 治疗的需 EPCs 。分离培养的 EPCs 鉴定采用细胞免疫荧光染色、 要。因此，寻找和建立一种安全、高效的人源化 RT-PCR 及流式细胞术，检测 EPCs 细胞的特异标志 EPCs 的分离和培养方法，将为 EPCs 的临床治疗 CD133、CD34 和血管内皮细胞生长因子受体 2 （VEGFR2 ）。 应用提供可能。 培养的 EPCs 应用 VEGF 进行诱导分化，并评价其分化成 在人胚胎发育过程中，早期胚胎血管中存在大 为血管内皮细胞的能力。 量尚未分化成熟的 EPCs[9] 。因此，本研究探索从 结果 分离的人胚胎主动脉 EPCs 细胞表达 EPCs 的标志 人胚胎早期（14 周内）的主动脉分离 EPCs ，建立 分子 CD133 、CD34 和 VEGFR2 。EPCs 在体外特定低血清 体外扩增 EPCs 和诱导其分化成为血管内皮细胞 培养条件下表现很强的增殖能力。培养的 EPCs 细胞经过 的技术方法，为 EPCs 的临床治疗应用提供实验依 VEGF 诱导后，细胞表达 CD133 明显降低，表达 vWF 、 据。 CD31 和 ELAM-1 增强，并且体外成管能力和摄取 Ac-LDL 能力增强，表明细胞分化成为血管内皮细胞。 1 材料与方法 1.1 主要试剂和仪器 结论 人胚胎早期主动脉的 EPCs 具有很好的体外自我更 DMEM/F12 干粉培养基、明胶、I 型胶原酶和 新能力和分化成为血管内皮细胞的潜能，可作为 EPCs 治 白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF ） 疗疾病的细胞材料。 均为美国 Sigma 公司产品；干细胞专用血清购自 【关键词】 血管内皮生长因子受体 2 ； 主动脉； 细 德国 Biochrom 公司；人表皮细胞生长因子（human 胞分离； 细胞分化