分子生物学的研究方法—DNA—蛋白质相互作用.ppt

第六节 研究DNA与蛋白质相互作用的方法;凝胶阻滞试验方法;;凝胶阻滞试验用途;2.6.2 DNasel足迹试验;DNasel足迹试验过程;从此混合物中除去蛋白质之后，将DNA片段群体加样在变性的DNA测序凝胶中进行电泳分离，经放射自显影，便可显现出相应于DNasel切割产生的不同长度DNA片段组成的序列梯度条带。但是，如果有一种蛋白质已经结合到DNA分子的某一特定区段上，那么它就将保护这一区段的DNA免受DNasel的消化作用，因而也就不可能产生出相应长度的切割条带。所以在电泳凝胶的放射自显影图片上，相应于蛋白质结合的部位是没有放射标记条带的，出现了一个空白的区域，人们形象地称之为“足迹” 。;足迹试验的优点;DNasel足迹试验发展;2.6.3 甲基化干扰试验;甲基化干扰试验的具体操作;甲基化干扰试验的用途;DMS化学干扰的主要局限性;2.6.4 体内足迹试验;体内足迹试验的方法;体内足迹试验优缺点;应用凝胶阻滞试验、DNasel足迹试验、甲基化干扰试验，以及体内足迹试验等多种用于研究DNA与蛋白质相互作用的基本实验手段，将有助于深入地探讨基因启动子元件的结构与功能，及其与蛋白质转录因子之间相互作用的有关细节；揭示mRNA转录超始和终止的分子本质与主要步骤；阐明在发育过程中基因表达调节的时空特异性；以及外源基因在转基因植株中表达的分子机理，等等。这些研究结果，将为我们提供大量重要的信息，以最终弄清基因表达调节的真实内容。 ;思考题