抗氧化金属硫蛋白的足细胞特异性过度表达可以减轻糖尿病肾病-公开课件（讲义）.ppt

Podocyte-Specific Overexpression of the Antioxidant Metallothionein Reduces Diabetic Nephropathy 足细胞内特异性过度表达的抗氧化金属硫蛋白可以减轻糖尿病肾病 糖尿病肾病DN 糖尿病肾病 肾衰 （DN） 损 伤 足细胞 （肾小球过滤屏障） 足细胞 1.上皮细胞 2.足突----裂孔----渗透性裂孔横膜 3.裂孔膜蛋白： Nephrin Podocalyxin 足细胞损伤途径 高血糖 糖基化终末产物 血管紧张素 氧化应激 仅对足细胞进行抗氧化保护，可否减少足细胞损伤，进而减轻糖尿病肾病。 金属硫蛋白MT 1.抗强氧化剂 ：防止羟自由基、过氧化亚硝酸盐、超氧 化物、过氧化氢氧化的作用独一无二。 2.仅在足细胞内特异性过度表达 效力是谷胱甘肽的50倍 足细胞特异性 抗强氧化性 MT 足细胞 保 护 ONLY 减少足细胞损伤 减轻糖尿病肾病 Nmt模型 FVB胚胎系 Nmt基因 （受小鼠nephrin启动的人类MTII基因） 启动足细胞中MT高效表达 Nmt3 Nmt7 足细胞中MT的高效表达 A：PCR MT在两个系株中均可表达，但在Nmt7系株中更高 B：蛋白电泳 MT在Nmt3和Nmt7组中分别增高18和6倍。 C：免疫组化 MT表达仅在转基因小鼠足细胞中 为什么要选用两个系株？ OVE26Nmt双转基因的模型 糖尿病肾病模型 Nmt模型 OVE26鼠 Nmt3/7鼠 杂交 OVE26Nmt双转基因 MT对DN影响的评估参数 糖尿病基本参数 蛋白尿 足细胞 肾小球形态 Parameter OVE26 OVE26Nmt FVB Nmt 血糖 (mg%) 600.00 ± 0.00 599.00 ± 1.00 175.00 ± 11.40 169.30 ± 19.40 糖化血红蛋白(%A1c) 9.84 ± 0.30 10.00 ± 0.30 4.65 ± 0.10 4.60 ± 0.10 体重 (g) 23.60 ± 1.00 23.30 ± 1.10 23.90 ± 0.50 25.60 ± 1.80 肾重(mg) 484.00 ± 18.00 515.00 ± 14.00 361.00 ± 15.00 359.00 ± 15.00 糖尿病基本参数 MT高效表达可减少蛋白尿产生 A B：Nmt3系株2月龄和4月龄的结果 CD：Nmt7系株2月龄和4月龄的结果 MT高效表达 蛋白尿减轻程度 Nmt7 Nmt3 Nmt7 Nmt3 基因位点的插入是随机的，极有可能N7的插入位点破坏了小鼠参与肾小球正常功能的基因，从而减低其保护作用。 MT在足够剂量时对足细胞不利。 只有待N7插入的位点确定，我们才可能区分是插入突变还是MT过度表达的影响  MT对DN 足细胞的改善 足突形态 裂孔膜蛋白 足细胞数目 足细胞的足突形态。 A：FVB B：OVE26 C：Nmt7 D：OVE26Nmt7 E：OVE26鼠足突密度比FVB鼠低33%， 而OVE26Nmt7鼠组却高于OVE26鼠。 裂孔膜蛋白的表达 A：肾小球中nephrin, podocalyxin ,GAPDH(磷酸甘油醛脱氢酶)蛋白：FVB、OVE、OVE26Nmt7 BC：B nephrin蛋白表达 C podocalyxin表达，以GAPDH表达进行标准化。O和ON总低于F组，但podocalyxin ON要高于O组。 足细胞数目 A-C：肾小球WT1基因染色的经典图像A：F B:O