黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究1).pdf

维普资讯 黑 曲霉酸性蛋 白酶酶学性质的研究 赵彩艳，程茂基，蔡克周，陈丽娟，汤海鸥 (安徽农业大学动物科技学院，合肥 2：0036) 摘 要：对黑曲霉茵株ANS．产酸性蛋白酶基本酶学性质的研究表明：酸性蛋白酶适宜pH在2．5—4．0之间， 在pH为3．5时。相对酶活最高；适宜温度在4O5O℃之间，在45 时，相对酶活最高；酸性蛋白酶有着较好的 热稳定性。曲酶粉在80℃保温至5rain保留有5I．4％的酶活，液态酶在80℃恒温水浴中保温Irain保留有54．6％ 的酶活力，曲酶粉较液态酶有着更好的抗热性；金属离子对酸性蛋白酶活力有一定的影响，在2．0mmolL·-的浓 度下，Mn“和Cu“酸性蛋白酶有较强的激活作用，Fe3．对该酶表现出明显的抑制作用。研究结果表明，黑曲霉茵株 ANS。产酸性蛋白酶可以作为生物饲料添加剂．． 关键词：黑曲霉；酸性蛋白酶；酶学性质 中图分类号：Q556+9：Q949．327，1文献标识码：A 文章编号：1001—0084(2006)03—0005—04 黑曲霉是一种因其酶系丰富、代谢产物多而被 黑[訇霉菌株 ANS。，由安徽农业大学动物科技 广泛应用的工业微生物。大量研究证实，黑曲霉产 学院动物营养实验室分离。 的酸性蛋白酶因其最佳反应pH较低(1—5)，与畜 1．1．3 培养基 禽体内消化系统pH值比较一致，常被添加于饲料 斜面培养基：斜面培养采用PDA培养基[。；发 中，用于弥补畜禽肠道内源蛋白酶分泌的不足，提 酵培养基采用麸皮：豆粕：1：1，加等量水拌匀，pH 高蛋白的消化率，降低腹泻。 自然。所有培养基用前均须在 121oC下灭菌20min。 近年来，随着饲料工业的快速发展，酸性蛋白 1．2 方法 酶作为一种生物饲料添加剂表现出的潜能越来越被 1．2．1 菌株的分离纯化 人们所关注。但是，目前对于酸性蛋白酶的酶学性 采用常规稀释分离法 。 质研究还比较少，作为饲料添加剂，它不仅要经受 1．2．2 酸性蛋 白酶酶活测定 饲料加工过程中的高温处理、动物胃肠道胃酸的影 酸性蛋白酶酶活测定 以酪蛋 白为底物，在 响，而且还要受饲料中的部分金属离子的影响，而 (40±2)oC，pH值3．0条件下 lmin水解酪素，产 这些过程中酶活极易受损，从而影响其作为饲料添 生1 mol酪氨酸所需要的酶量为一个酶活单位。 加剂的效果。鉴于此 ，本文对黑曲霉ANS。产酸性 Folin法测定，酶活力单位以IU·g表示。酸性蛋 蛋 白酶重要特性进行了研究。 白酶酶活计算公式： 1 材料与方法 4／(]U·g)=(CxK)l(txWxM) 1．1 材料 式中：A为酶活(IUg·)，C为根据标准曲线求 1．1．1 主要原料及试剂 得的酪氨酸的浓度(gm·L--)，K为稀释倍数，t为反 麸皮、豆粕(在合肥饲料原料市场购买)；酪素 应时间(min)，W为每毫升粗酶液含有的固态发酵物 (杭州微生物试剂厂生产)；福林酚(Sigma公司生 的质量 l】．1g，M为酪氨酸的分子质量(131gm·ol)。 产)；L一酪氨酸(上海医药试剂集团生产)。 1．2．3 祖酶液的制备 1．1-2 菌株 菌种接种于准备好的发酵培养基上，3O。=【恒 温培养 72h后，在250mL三角瓶中直接加入培养 收稿 日期：2005—09—07