NYT 1598-2008食用植物油中维生素E组分和含量的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 67.050X 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1598—2008食用植物油中维生素E组分和含量的测定高效液相色谱法Determination of tocopherol content in edible vegetable oils---High performance liquid chromatography2008-07-01实施2008-05-16 发布中华人民共和国农业部发布 NY/ T 1598-2008前言本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：谢立华、李培武、丁小霞、张文、陈小媚、汪雪芳。I NY/T 1598--2008‧高效液相色谱法食用植物油中维生素E组分和含量的测定1 范围本标准规定了食用植物油中维生素E组分和含量的测定方法。本标准适用于食用植物油中维生素E组分和含量的测定。本标准检出限分别为:α- VE:0.2 mg/ kg;β- VE:0.2 mg/ kg;- VE:0.1 mg/ kg; - VE:0. 1 mg/ kg.2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的弓用而成为本标准的条款。凡是注日期的弓[用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5524植物油脂检验扦样、分样法GB/T 6682　分析实验室用水规格和实验方法（GB/TISO 3696--1987）3　方法原理样品皂化后，用无水乙醚提取不皂化物中的维生素E,浓缩，高效液相色谱仪分离维生素 E，紫外检测器检测，外标法定量。4 试剂除非另有说明，均使用分析纯试剂和二级水。4.1 无水乙醚:不含有过氧化物。用5mL乙醚加1mL10%碘化钾溶液，振摇1min，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉溶液,水层呈蓝色，则无水乙醚中含有过氧化物。4.2无水乙醇：不含有醛类物质。取2mL银氨溶液于试管中，加人0.5mL乙醇,摇匀，再加入氢氧化钠溶液,加热,放置冷却后，如有银镜反应则表示无水乙醇中含有醛类物质。4.3无水硫酸钠。4.4甲醇，色谱纯。4.5100g/L抗坏血酸溶液,现配现用。4.61g/L氢氧化钾溶液。4.7100g/L氢氧化钠溶液。4.850g/L硝酸银溶液。4.9银氨溶液4.9.1检查方法：取2mL银氨溶液于试管中,加入少量乙醇,摇匀,再加人氢氧化钠溶液，加热,放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。4.9.2 脱醛方法:取2 g硝酸银溶于少量水中。取 4 g 氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入 1 L乙醇中，振摇后，放置暗处2d(不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50 mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。1 NY/T 1598--20084.10维生素E标准溶液4. 10.1维生素 E标准溶液配制用无水乙醇(4.2)分别溶解 α-VE,β-VE,VE,-VE 四种维生素 E 标准品，使其浓度大约为1mg/mL。使用前用紫外分光光度计分别标定此四种维生素的浓度。4. 10. 2维生素 E标准溶液浓度的标定取维生素 E标准溶液若干微升，用无水乙醇分别稀释定量至3.0mL,按给定波长测定各维生素的吸光值，用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件见表1。表 1 维生素 E标准溶液浓度标定条件比吸光系数,E%波长,nm加人标样的量，μL标准物质294100. 0α-VE29691. 6100. 0β-VE29892.8-VE100. 029891. 2a-VE100. 0维生素 E标准溶液浓度(ci)按式(1)计算：5A×1(1)C1 V X 10-3E100 式中:维生素标准溶液浓度的数值，单位为克每毫升（g/mL）；C1A—维生素的平均紫外吸光值;V——加人标准液体积的数值,单位为微升(μL);E一某种维生素 1%比吸光度数的数值;5标准液稀释倍数。VX10-35仪器设备5.1实验室常用仪器设备。5.2电子天平，精度0.001g。5.3紫外分光光度计。5.4高速离心机,5000 r/min。5.5振荡摇床,120 r/min。5.6高效液相色谱仪带紫外分光检测器。5.7 Nova-pak Ci:色谱柱(3. 9 mmX150 mm)6 操作步骤6.1样品制备按GB5524要求制备样品。6.2　皂化准确称取5g试样于皂化瓶中,加30mL无水乙醇,混匀。加5mL抗坏血酸溶液(100g/L),20mL氢氧化钾溶液(4.6)，置于振荡摇床皂化1h。6.3提取将皂化后的试样移入分液漏斗中，用50mL水分2次～3次洗皂化瓶，洗液并人分液漏斗中