NY_T 1798—2009 植物油脂中磷脂组分含量的测定 高效液相色谱法.doc

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1798—2009 植物油脂中磷脂组分含量的测定 高效液相色谱法 Determination of phospholipids in vegetable oil by HPLC 2009-12-22 发布 2010-02-01实施前 言 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：李培武、王秀嫔、张文、汪雪芳、陈小媚、丁小霞、谢立华、周海燕。 植物油脂中磷脂组分含量的测定 高效液相色谱法 本标准规定了高效液相色谱法(HPIC法)测定大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂组分和含 量的方法。 本标准适用于大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰 肌醇(PI)的测定。 本标准磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)方法检出限分别为：012 mg／g、 038 mg／g、075 mg／g。 本标准磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)线性范围分别为008 mg／m～ 800 mg／mL、015 mg／mL～1500 mg／mL、030 mg／m30.00 mg／mL。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 5524动植物油脂扦样 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 油脂试料用氯仿溶解提取，氨基固相萃取柱纯化，高效液相色谱分离，外标法定量。 4 试剂 除非另有说明，均使用分析纯试剂；水为GB／T 6682规定的二级水。 4．1 氯仿(CHCl)。 4．2乙酸(CHOOH)。 4．3乙酸铵(CHCOONH。)。 4．4乙醚(CH3CH2CH2CH3)。 4．5甲醇(CHOH)，色谱纯。 4．6正己烷(CH14)，色谱纯。 4．7异丙醇[(CH)2CHOH]，色谱纯。 4．8 乙酸乙醚混合溶液(2144＝V＋V)：取乙酸(4．2)醚(4．4)混合。 4．9氯仿异丙醇混合溶液(21＝V＋V)：取氯仿(4．1)和异丙醇(4．7)混合。 4．10正己烷异丙醇混合溶液(11＝V＋V)：取正己烷(4．6)和异丙醇(4．7)混合。 4．11 乙酸铵水溶液(025 mol／)：称取1925 g乙酸铵(4．3)，用一级水溶解并定容到1 000 mL。 4．12磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇标准品，纯度95％。 4．13磷脂标准储备溶液(10 mg／m)：准确称取磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇 (PD各100 mg(精确至1 mg)，用正己烷异丙醇混合溶液(4．10)溶解并定量至10 mL，制备成10 mg／ mL的标准储备溶液。淡标准储备溶液在4下，可以稳定储藏3个月。 0.1mg 5．2 具塞离心管：100mL 5．4真空旋转蒸发仪：转速为10 r／min～120 r／min。 55 氨基固相萃取柱：6 m，1 000 mg或性能相当者。 5．6离心机：转速至少为4 000 r／min。 5．7液相色谱仪：带有紫外检测器；色谱柱：正相硅胶柱Si 605，5m，250 mm4.6 mm或性能相当者。 6试样制备 按GB／T 5524进行扦样和分样，分取50 g试料，装入样品瓶备用。 7 分析步骤 7．1 提取净化 准确称取油脂试料4 g(精确至1 mg)，置于100 mL具塞试管(5．2)中，加入500 mL氯仿(4．1)，漩 涡混合。先用10 mL氯仿(4．1)活化氨基固相萃取柱(5．5)，将100 mL油脂氯仿溶液移入氨基硅胶 固相萃取柱中，然后依次用20 mL氯仿异丙醇混合溶液(4．9)和30 mL的乙酸乙醚混合溶液(4．8) 洗脱小柱，弃去洗脱液，然后用30 mL甲醇(4．5)洗脱出磷脂，再重复四次，并收集到的150 mL甲醇 溶液集中，N吹干，加入100 mL正己烷异丙醇混合溶液(4．10)溶解，在4 000 r／in下离心5 min，取上清液用于液相色谱分析。 7．2色谱分析 取磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(P标准储备溶液(4．13)用正己烷异丙醇 混合溶液