实验9淀粉酶的纯化分析.doc

实验九 工业淀粉酶的纯化分析 一．目的 工业淀粉酶是粗酶制品，含有大量的杂质。本试验的目的是学习纯化的方法和步骤，掌握蛋白质（酶）纯化过程的基本概念。 二．步骤 工业淀粉酶 g，加蒸馏水 ml溶解；取 ml，-20℃保存。其余70%饱和度硫酸铵沉淀，离心后 ml溶解，分装后-20℃保存。 取 ml沉淀溶解液上样，saphedex-G25脱盐，收集蛋白部分共 ml，-20℃保存。 取上述保存的样品，分别测定酶的活力和蛋白质的含量。 三．结果计算： 数据、计算过程和结果请填入表格一 其中，回收率是指（相对于初始时）总酶活力剩余的百分数；纯化倍数是指比活力提高的倍数。 四．结果分析（分析该计算结果产生的原因）： 纯化的目的是去除杂蛋白，同时尽可能减少目标蛋白的损失（丢失和失活）。所以正确的纯化步骤中，酶的总活力应该会 。但是比活力会 。但是本次实验总活力出现了相反的结果，请分析其中的原因（推测导致这个现象产生的原因）。提示：可以在图书馆检索有关文献， 样品项目 粗酶溶液 70%硫酸铵沉淀溶解液 脱盐后蛋白质收集液 备注 酶浓度（u/ml） 总活力（u） 活力回收率（%） 100% 蛋白浓度（mg/ml） 总蛋白（mg） 比活力（u/mg） 纯化倍数 1 表一 结果计算