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样品稀释对毛细管电泳分离检测DNA片段的影响* 宋立国 陈 洪 张 乐 程介克 * 武（汉大学化学系 武汉 430072） 提 要 通过理论推导和实验验证表明:适当稀释DNA样品溶液，采用流体力学进样或电动进样都不会较大 地减低峰高，而DNA片段毛细管电泳的分离效率和分离度还能有所提高。采用稀释样品的方法可提高DNA样 品的使用效率。采用羟乙基纤维素无胶筛分介质分离了DNA片段。用激光诱导荧光 氩（离子激光器，488nm）电 荷耦合器件检测。用低浓度的筛分介质 0（.4％ィ）分离了分子质量较大的 DNA-Hind 全部8个片段(125bp～ 23130bp)。用高浓度的筛分介质 1（.6％ィ）分离分子质量较小的pBR322-Hae 22个片段 1（8bp～587bp）。将 pBR322-Hae DNA样品溶液稀释10倍时，123bp和124bp两个片段得到了分离。 关键词 毛细管电泳，激光诱导荧光，电荷耦合器件，样品稀释，DNA片段 分类号 O658 1 前言 样品的使用效率，具有重要的实际意义。 用毛细管电泳分离DNA片段具有高效、高速、 2 实验部分 进样量少和耗用试剂低等优点 ，正成为分子生物学 2.1 实验装置 中重要的研究手段，在生物医学、法医学等领域发挥 自行组装的激光诱导荧光电荷耦合器件毛细管 着越来越重要的作用[1。在分子生物学实际的研究 电泳装置，由高压电源 华（中理工大学研制）、毛细管 工作 中，DNA样品溶液体积极小，一般只有 L级， (DB-1,JW ScientificFolsom,CA,USA，总长度 而毛细管电泳仪，无论是商品仪器还是实验室组装 60cm，有效分离长度 55cm),氩离子激光器 上（海 的仪器，都要求样品溶液最少要有数微升到数十微 埃恩激光技术有限公司）、单色仪(HR320,Instru- 升，这样才能使毛细管的进样端和电极插入到样品 mentSA,Inc.,USA)、电荷耦合器件 (CCD,512× 溶液中，完成进样操作。由于DNA样品较容易被污 512EGGPAR,USA)、计算机(Gateway20004DX 染降解，与毛细管或电极接触后，一般仅在一天左右 2-0v)等部分组成[7 DNA片段就会基本完全降解。在需要使用DNA分 2.2 试剂 子质量标准物(DNAMarker)作毛细管电泳条件实 三羟甲基氨基甲烷(Tris),硼酸、乙二胺四、乙 验时，往往需要大量的DNA样品试剂，而这些DNA 酸二钠(EDTA)均为国产分析纯试剂；羟乙基纤维 试剂一般价格都较昂贵。在实验中有时由P R扩增 素为Se 公司产品2%的水溶液25℃时的粘度为 的DNA样品溶液的离子强度较高，会导致毛细管 4Pa·s）；噻唑橙 (TO)为Aldrich产品； DNA- 电泳分离效率降低，分离度不能满足要求[2。样品堆 Hind 及pBR322-Hae 购 自华美生物工程公司， 积(samplestarking)作为一种提高毛细管电泳检测 二者都保存于 10mmol/LTris-HC1,10mmol/L 灵敏度的柱上浓缩方法，由于其简便易行，近来得到 NaCl,lmmol/LEDTA(pH7.8)的缓冲溶液中。 了越来越广泛的应用[3,4。样品堆积是通过将分析样 载体电解质溶液采用1TBE缓冲溶液，由89 品溶于离子强度低于电泳载体缓冲溶液后再进行流 mmol/LTris,89mmol/L硼酸和 2mmol/LEDTA 体力学进样 （电堆积富集）[5或电动进样 场（增强进 组成。筛分介质溶液的配制和DNA片段毛细管电 样）[6来实现的。本文依据这一原理通过理论推导和