两种细菌的毛细管电泳分离及其与药物相互作用的研究.pdf

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究报告 第 7期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 7 月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 9 17 ～92 1 两种细菌的毛细管电泳分离及其与药物相互作用的研究 1, 2 2 2 , 3 2 , 4 1, 2 肖尚友 　阴永光 　宋广涛 　杨元娟 　夏之宁 1 ( ) 2 ( ) 重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室 , 重庆 400044 　　 重庆大学化学化工学院 ,重庆 400044 3 ( ) 4 ( ) 中国科学院长春应用化学研究所 ,长春 130022 　　 重庆市药剂学校 ,重庆 400030 摘 　要 　通过对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的毛细管电泳行为的研究 ,包括对细菌样品预处理 、缓冲液 、检测 波长以及聚合物添加剂对分离度的改进等的考察 ,在优化的实验条件下 ,实现了大肠杆菌与金黄色葡萄球菌 的快速分离 ,从而建立一种新的细菌辅助识别与定性的补充方法 。将抗菌药物阿奇霉素与金黄色葡萄球菌混 合培育 ,发现由于阿奇霉素抑制细菌表面蛋白合成 ,造成与金黄色葡萄球菌作用后 ,细菌表面电荷密度降低 , 表现为阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的电泳淌度的影响 ,而且培育时间与金黄色葡萄球菌的淌度线性相关 。 关键词 　细菌 , 毛细管电泳 , 大肠杆菌 , 金黄色葡萄球菌 , 阿奇霉素 1　引　　言 细菌是单细胞原核微生物 ,了解与控制细菌的各种活动 ,对各种细菌进行识别和性质研究是微生物 科学的研究基础 。然而往往多种细菌共存于同一环境体系之中 ,所以发展快速 、高效的细菌分离识别分 析方法十分重要 。目前 ,仍缺乏对各种细菌进行快速高效分离分析的方法 。基于细菌形态识别的技术 仍占据着主要地位 。近年来 , 根据其物理化学特性研究细菌的方法有质谱法 [ 1 ] 、电化学法 [ 2 ] 、色谱 法 [ 3, 4 ] 、离子淌度谱法 [ 5 ]及光谱法 [ 6, 7 ] 等 。这些方法具有快速和定量准确的特点 。电泳作为一种分离手 段早已用于细菌的分离与性质研究[ 8 ] 。 细菌的细胞壁含有蛋白质 、唾液酸等 ,在一定 pH 的水溶液中离解而带一定的电荷 。细菌表面的荷 电情况与溶液的组成 、pH、离子强度 、温度等因素相关 。细菌的类型 、生长阶段及生长条件不同 ,其表面 的聚合物组成也不同 ,因此表现为其电泳淌度和等电点存在差异 。这是利用电泳淌度或等电点的不同 对细菌进行分离和表征的基础 [ 9, 10 ] 。毛细管电泳用于分离粪肠球菌 、化脓链球菌 、无乳链球菌 、肺炎双 球菌和金黄色葡萄球菌的混合体系 [ 11 ] ,是研究细菌混合体系的组成和分离分析的有效手段 。无胶筛分 毛细管电泳被用来对啤酒酵母菌 、藤黄微球菌 、产气肠杆菌 、荧光假单胞菌的分离与淌度测定 [ 9 ] ,对药 品和果汁中嗜酸乳杆菌 、婴儿双歧杆菌的定性与定量分析 [ 12 ] , 以及对尿液中细菌病原体的分析 [ 13 ] 。毛 细管凝胶电泳还被用于进行细菌混合物的分离 [ 14 ] 。毛细管电泳不仅可以分离不同种属的细菌 ,也能够 分离不同亚型细菌 [ 15 ] 。 A rm strong等 [ 16 ]采用毛细管电泳 激光诱导荧光微流体系对细菌的生存状态进行过考察 。不同的荧 光探针可分别与活细菌和死细菌发生特异性的结合 ,利用荧光强度可对样品中细菌的生存状态进行