毛细管电泳法在手性药物分离中的应用.doc

毛细管电泳法在手性药物分离中的应用 世界科学技术一中医药现代化★思路与方法探讨 摘要:毛细管电泳是一种毛细管为分离通道,以高压直流电为驱动力,依据样品各组分之间 淌度和分配行为上的差异而实现分离的高效,高选择性的色谱技术,广泛应用于农业,医药,化工等 领域.该技术对手性药物分离分析具有独特的优点.本文对近年来高效毛细管电泳用于手性化合物 拆分的主要分离模式进行了综述.可以预见,该技术在生命科学领域将有着越来越广泛的应用,尤 其是毛细管电泳单细胞分析正在成为细胞水平药理学及了解生命过程的一种活体检测手段. 关键词:毛细管电泳手性药物分离分析综述 手性问题牵涉到生命的起源及各种动植物的 生存和演化,有手性的分子在人类的生命活动中起 着极为重要的作用.天然或半合成药物几乎都有手 性,其中98%以上为光学活性物质;全合成药物中 40%为手性药物;目前常用的700多种药物有一半 至少含有一个手性中心,而87%以上的手性药物是 以外消旋体的形式销售的.随着对手性药物药理活 性研究的不断深入,人们已认识手性药物对映体生 理作用和代谢过程的差别.特别是1992年美国食品 与药品管理局(FDA)提出发展单一对映体生产计划 和对映体药物纯度的鉴定规定后,如何能快速,准 收稿日期:2004—03—31 修回日期:2004—11—19 确的分离和分析测定手性药物已成为医药界关注 的重要课题.因此,手性药物的分离测定,对研究药 物的药动学过程,药理和毒理机制以及手性药物的 质量控制等都有重要意义. 常用的手性分离方法有结晶法,色谱法和酶 法¨1.其中色谱法包括液相色谱,气相色谱和超临 界色谱.近年来,用毛细管电泳(CE)直接分离手性 对映体得到很快发展1,尤其是对开发中的新药的 对映体的分离和生物体内药物代谢过程中对映体 的分离,CE更独具高效快速,样品和试剂耗用量 少,可供选择的分离模式多等优点.用于手性拆分 的模式有自由溶液区带电泳(CZE),毛细管凝胶电 泳(CGE),胶束电动色谱(MEKC),毛细管电色谱 - k江苏省科技厅科技攻关重大项目(BK2001209):通塞脉片复方活性部位群及其药效学研究,负责人:蔡宝昌. - k-k联系人:李伟东,在职博士,从事中药复方物质基础研究,Tel:025E—mail:liweidong323@yall00.corn.an. 蔡宝昌,教授,博导,本刊鳊委,南京中医大学副校长,Tel:025E—mail:bccai@hotmail.corn. [ScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMed~ineandMateriaMed~a347 2005第七卷第一期★Vo1.7No.1 (CEC)以及毛细管等速电泳(CITP)等. 一 ,毛细管区带电泳(CZE) CZE是CE中最基本,最普遍的一种模式,故一 些位置异构体如反式丁烯二酸(富马酸)和顺式丁 烯二酸(马来酸)等可用CZE直接分离1.此外,其 它手性对映体的拆分还是需加入各种不同的手性 选择剂才能达到分离目的.常用的手性选择剂有环 糊精,冠醚,胆汁酸盐,手性混合胶束,手性选择性 金属络合物,蛋白和糖等7种类型.其中以环糊精, 冠醚较为常用. 1.环糊精 发展最快,应用最多的手性选择剂首推环糊精 (CD),环糊精是由多个吡喃葡萄糖单元以1,4.糖苷 键首尾相连形成的环状低聚糖,其中六聚,七聚,八聚 体分别称为.,p.和.环糊精,分别含有6,7和8个 葡萄糖单元及3O,35和40个手性中心.手性中心为 受体分子提供了不可多得的包容物质基础和不对称 环境.CZE中常用的有of..,p.和^y.CD及CM.p.CD和 TM.B.CD.牛长群等H1手性分离了盐酸曲马多和盐酸 氯吡格雷2种药物的光学异构体,分离条件为盐酸曲 马多:缓冲液为100mmol/LTris(用磷酸调至pH2.4), 内含20mmol/L甲基.B.环糊精.盐酸氯吡格雷:缓冲 液为100mmol/LTris(用磷酸调至pH4.8),内含 20mmol/L甲基.p.环糊精.侯经国等采用p.环糊 精及其衍生物作为手性选择剂对毛果芸香碱对映体 进行了分离,研究了环糊精类型和浓度对分离的影 响,同时考察了背景电解质pH,操作电压和温度等因 素对对映体分离的影响,结果采用羟丙基一p一环糊精 (HP.B.CD)可以使毛果芸香碱对映体达到基线分离, 优化条件下手性分离度可达2.79.李晓海等1建立了 HP.B.CD为手性选择剂,以40mmol/L,Tris.H,PO (pH4.0).3.2mmol/LHP.B.CD,分离电压15kV,柱温 16~(2,检测波长254nm为色谱条件的HPCE分析方 法,对d及l