HPLC法测定复方金甲合剂中黄芩苷的含量.doc

HPLC法测定复方金甲合剂中黄芩苷的含量 　　摘要：目的 建立复方金甲合剂中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用HPLC法，C18 ODS为色谱柱，甲醇-水-磷酸溶液（47：53：0.4）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为280nm。结果 黄芩苷进样浓度在15.2～243.2μg/ml范围内线性良好，方法平均回收率为99.5%，RSD为1.17%（n=6）。结论 本文建立的HPLC法可作为复方金甲合剂质量控制方法。 　　关键词：HPLC； 复方金甲合剂； 黄芩苷 　　复方金甲合剂由黄芩、当归、红花、郁金、柴胡、陈皮等中药材组成，是我院胸外科医院制剂，具有疏肝理气，活血化瘀，消肿止痛，用于胸肋跌打损伤、淤血，伤积于肋下疼痛难忍者，效果良好。质量标准属于安徽省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准，无含量测定项，为控制本品的质量，采用高效液相色谱法测定黄芩有效成分黄芩苷的含量。 　　1 仪器与试药 　　高效液相色谱仪（L6-DP6型）（生产厂家：北京普析通用设备科技有限公司）；色谱柱为依利特C18（5？滋m，4.6mm×150mm）。 　　黄芩苷对照品（含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为110715-200212）；甲醇（色谱纯，美国天地）、磷酸（国药）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯；复方金甲合剂（太和县中医院，批20140509规格250ml/瓶）。 　　2 方法与结果 　　2.1色谱条件 色谱柱为依利特 C18（5？滋m，4.6mm×150mm）；甲醇-水-磷酸溶液（47：53：0.4）为流动相；流速为1ml/min；检测波长为280nm；柱温为30℃；进样量为10？滋l。 　　2.2样品溶液的制备 　　2.2.1对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷14.16mg，加甲醇制成含黄芩苷μg/ml的溶液，摇匀，即得。 　　2.2.2供试品溶液的制备[1] 取本品2ml，置于50ml容量瓶中，精密量取25ml甲醇于容量瓶内，再用0.4%的磷酸溶液定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.2.3阴性对照溶液的制备 按处方量称取除黄芩外的处方成份，照复方金甲合剂制备工艺制成阴性样品。精密称取阴性样品2ml，照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，用0.45μm微孔滤按照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液，分别注入色谱仪。实验结果表明：阴性样品不干扰供试品溶液的测定。 　　2.4线性及范围 黄芩苷对照品储备液：精密称取黄芩苷对照品19.02mg，置50ml量瓶中，用流动相制成每1ml含黄芩苷0.38mg的溶液，作为对照品试液。 　　分别精密吸取1、2、4、8、16ml于25ml棕色量瓶中，以流动相稀释至刻度，分别精密吸取各20μl，注入液相色谱仪测定，以进样浓度（μg/ml）对峰面积A进行线性回归分析，得回归方程y=5.51791×10-9x -0.0025749（r=0.9994）。表明黄芩苷浓度在15.2～243.2μg/ml范围内线性关系良好。 　　2.5精密度试验 取同一对照品溶液（30.4μg/ml），在选定的色谱条件下，依法测定，重复进样6次，以黄芩苷峰面积计算相对标准偏差，RSD为0.87%（n=6）。 　　2.6重复性试验 取同一样品（批号140726）6份，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定。平均含量为1.5 mg/ml，RSD为1.01%（n=6）。 　　2.7加样回收试验[2] 取已知含量的样品（批号含量为： 1.5 ?/ml，）6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（0.94 mg/ml）2ml，按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。 　　2.8稳定性试验 取同一供试品溶液（批号140726），分别在放置0、2、4、8、12、24h后，依法测定。RSD为1.09%（n=6）。表明供试品溶液在24h内稳定性较好。 　　2.9样品含量测定 取供试品溶液（批号为140726，140728，140730）和对照品溶液各20？l，注入色谱仪，依法测定。每批测定6次。 　　3讨论 　　3.1考察了甲醇-0.4%磷酸水（体积比47∶53）、甲醇-0.2%磷酸水（体积比47∶53）[3，4]等流动相，以甲醇-0.4%磷酸水（体积比47∶53）的保留时间较为适宜，且分离度良好，其余几种条件黄芩苷保留时间短，分离度差。 　　3.2 对样品和对照品处理进行了考察，结果表明样品用纯甲醇处理的样品和对照品峰出现前沿，而用流动相处理后，峰对称性、分离度良好。 　　3.3采用HPLC法测定复方金甲合剂中黄芩苷的含量，操作简便，结果准确可靠