HPLC法测定金银花颗粒中黄芩苷的含量.doc
HPLC法测定金银花颗粒中黄芩苷的含量
组长：修远组员：王赛飞郝运刘麟季鹏孙硕
王赛飞郝云找文献和实验相关资料
修远季鹏做实验
孙硕刘麟准备和清理实验用具
【摘要】目的：建立金银花颗粒中黄芩苷的的含量测定方法。方法：采用PhenomenexSynergiC18×250mm，4μm)为色谱柱，以甲醇－0.1％磷酸溶液(47：53)为流动相，280nm为检测波长，柱温为30℃。结果：黄芩苷浓度在mg·mL-146〕，平均回收率为%，RSD=%。结论：该方法简便、准确，别离度好，可用于金银花颗粒
【关键词】金银花颗粒；黄芩苷；HPLC
前言
金银花颗粒是《伤寒论》中经典方金银花汤的现代制剂，主要成分为柴胡、黄芩、甘草、党参等七味药材，具有解表散热、疏肝和胃等成效，用于寒热往来、胸胁苦满、心烦喜吐、口苦咽干，其临床运用非常广泛。柴胡、黄芩都是方中主药，由于目前无法提供柴胡对照品，故本文重点对黄芩进行分析并建立其含量测定的方法。文献报道金银花颗粒的含量测定主要采用高效液相色谱法测定黄芩中黄芩苷的含量，为有效控制产品质量，本文建立了高效液相色谱法测定金银花颗粒中黄芩苷的含量，本方法效果良好，定量准确，快速。
1、仪器、试剂、试药、对照品、供试品
仪器高效液相色谱仪〔安捷伦1100液相色谱仪系统〔四元泵〕〕；岛津UV2450。
试剂甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
对照品黄芩苷对照品〔中国药品生物制品检定所，批号：110715—200212，含量测定用〕。
供试品由学校提供〔批号。
2、色谱条件与系统适用性试验
色谱条件
检测波长的选择
根据测定成分黄芩苷的光谱，在近280nm处有最大吸收，应选择检测波长为280nm。
·仪器性能
仪器型号：UV-2450
nm
·光谱扫描参数设置
扫描范围：2nm
nm
扫描速度：中
流动相的选择
根据参照《中国药典》2010年版一部标准及试验数据〔见耐用性项下〕，流动相为甲醇－0.1％磷酸溶液(47：53)时，对照品样品有很好的别离度，峰形良好，符合要求。
色谱条件与系统实用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－0.1％磷酸溶液(47：53)为流动相；检测波长为280nm；进样量10μl；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷7.7mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，得0.308mg/ml对照品储藏液，精密量取对照品储藏液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，得0.0308mg/ml的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取装量差异下的本品，研细，取约3克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%乙醇50ml，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得。
测定方法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各10注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，即得。
色谱柱的别离度和理论板数、拖尾因子
取黄芩苷对照品和供试品各进样10μl，按上述色谱条件进行测定，别离度均大于，理论板数到达3000以上，拖尾因子左右，符合要求。
重复性
精密吸取黄芩苷对照品溶液〔/ml〕，测定6次，结果〔见表1〕说明，重复性试验RSD为0.19%，符合要求。
表1重复性试验结果
测定次数
1
2
3
4
5
6
平均值
对照品峰面积
3、方法学考察
精密度
取同一批试品6份，照试验所得方法测定。结果〔见表2〕说明，重复性试验RSD为0.71%，符合要求。
表2供试品重复性试验结果
测定次数
1
2
3
4
5
6
平均值
黄芩苷
mg/袋
专属性
照上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保存时间的色谱峰，而阴性对照色谱在此保存时间处无吸收峰，说明处方中其它成分对黄芩苷测定无干扰。
空白阴性对照溶液制备：按处方比例缩小10倍，除去黄芩苷，照工艺方法制备。
3.3线性
精密量取上述μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以黄芩苷对照品色谱峰峰面积〔Y〕为纵坐标，黄芩苷浓度〔X〕为横坐标，绘制标准曲线，见下表3。线形回归方程Y=34102.6X－31.1，r＝0.999946。线形范围为0.00308mg/ml～0.308mg/ml。
浓度mg/ml
616
平均峰面积
RSD%
1.78%
0.16%
0.14%
0.11%
0.33%
0.35%
线形回归方程
Y=Kx+b
相关系数r=
斜率k=
截距＝
准确度〔加样回收试验〕
取含量33.6mg/袋，%