第二讲 延氇脂、脂蛋白及载脂蛋白测定 .ppt

血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定 检验教研室 一、血脂测定 血脂测定项目 TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp（a）、ApoAI、ApoB等。 检测项目的合理选择 临床常规血脂测定：TC、TG、HDL-C 及LDL-C这四项，有条件的实验室可测定ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)。 特殊检查项目：如Apo（AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E）、FFA、CETP、LPL、LCAT测定等，多用于科研或临床特殊病例研究。 血脂和脂蛋白检测前应注意的问题 分析前主要影响因素有： 1.生物学因素 如个体间、性别、年龄和种族等。 2．行为因素 如饮食、肥胖、吸烟、紧张、饮酒、饮咖啡和锻炼等。 3．临床因素 如①疾病继发；②药物诱导4．标本收集与处理 建议： 1．抽血前2周保持平时的饮食习惯。 2．抽血前3天避免高脂饮食，24小时内不饮酒，不作剧烈运动。 3．应在禁食12～14小时后空腹抽血。 4．除卧床的患者外，一般应坐位休息5分钟后抽血。 5．抽血前最好停用影响血脂的药物数天或数周，否则应记录用药情况。 （一）血清外观分析（血清冷置试验） * 混浊 （TG增高） 下层浊（VLDL增高）Ⅴ型 下层清（VLDL正常）Ⅰ型 均匀混浊 （VLDL↑） TC正常 Ⅳ型 上层奶油样 （CM↑） TC增高 Ⅱa型 TC正常 正常人 清亮 （TG正常） TC↑ Ⅱb，Ⅲ型 空腹 血清 测TC 4℃过夜 测TC （二）血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。 TC测定方法很多，约200多种，分为化学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。 1、化学测定法 主要有两类 （1）Liberman-Burchard反应 简称L-B反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。 （2）Zak反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较L-B反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。 2、酶法 胆固醇酯 胆固醇 ＋ 脂肪酸 胆固醇 ＋ O2 胆烷-4-烯-3酮 ＋H2O2 H2O2 ＋ 4AAP ＋酚 红色亚胺醌 ＋ H2O CEH ChOD POD 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。 酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析，但也存在有一些不足，CEH对胆固醇水解不完全，表面活性剂影响CEH活性，黄疸血清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低。 【参考范围】3.10～5.70mmol/L 【临床意义】血清TC含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。①20岁以上随年龄↑而↑，70岁以后则有下降趋势。②20～40岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。③城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。④脑力劳动者高于体力劳动者。 病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇血症、糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。 病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢、营养不良。 （三）血清甘油三脂测定 TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于VLDL和CM中，临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。 1、化学法 基本步骤可归纳为四步 （1）提取：甘油三脂的提取 采用合适的溶剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有： 1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。 2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。 3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。 （2）皂化：甘油三脂的水解 一般都采用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。 （3）氧化：甘油的氧化 最常用的氧化剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应