第三章 分子生物学常用技术和基本原理.pdf

第三章 分子生物学常用 第三章 分子生物学常用 技术和基本原理 技术和基本原理 第一节 分子生物学常用工具酶 第一节 分子生物学常用工具酶 一、限制性核酸内切酶与DNA分子的体外切割 一、限制性核酸内切酶与DNA分子的体外切割 1 来源与作用： 原核生物中的一类防御武器，可 1 来源与作用： 原核生物中的一类防御武器，可 以将外源性DNA分子切割成大小不同的片断，而细 以将外源性DNA分子切割成大小不同的片断，而细 菌本身的DNA由于修饰酶（通常为甲基化酶）的保 菌本身的DNA由于修饰酶（通常为 的保 护作用，免受降解。与甲基化酶共同构成细菌的限 护作用，免受降解。与甲基化酶共同构成细菌的限 制修饰系统，限制外源DNA， 保护自身DNA。1970 制修饰系统，限制外源DNA， 保护自身DNA。1970 年首先在流感嗜血杆菌中发现Hind Ⅲ 。 年首先在流感嗜血杆菌中发现Hind 。 2、定义： 定义： 2 命名： 2 命名： 3、分类：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3、分类： （基因工程技术中常用Ⅱ型） 4 II 型限制酶的特点 4 II 型限制酶的特点 Ⅱ类酶识别序列特点 回文结构(palindrome) GGATCC GGATCC CCTAGG CCTAGG 切口 ：平端切口、粘端切口 Hind Ⅱ Bam H Ⅰ GTCGAC GGATCC CAGCTG CCTAGG GTC GAC G +GATCC + + CAG +CTG CCTAG G 端切口 粘端切口 同功异源酶 同功异源酶 来源不同的限制酶，但能识别和切割 来源不同的限制酶，但能识别和切割 同一位点，这些酶称同功异源酶。 同一位点，这些酶称同功异源酶。 Bam H Ⅰ GGATCC G GATCC + + CCTAGG CCTAG G Bst Ⅰ GGATCC G +GATCC + C