第五章酶类药物.ppt

3、检验方法 （1）质量标准 ①规定每1g胃蛋白酶应至少能使凝固卵蛋白3000g完全降解； ②在109℃干燥4h，失重不超过4%； ③每1g含糖胃蛋白酶中含胃蛋白酶活力不少于标示量规定。如120单位等。 （2）活力测定 酶活定义：在一定条件下，每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量，为1个蛋白酶活力单位。 过程：P101 2、生产工艺 （1）工艺路线： （三）糜蛋白酶（Chymotrypsin，EC3.4.4.5） 胰蛋白酶可激活糜蛋白酶原成α-糜蛋白酶。 2、生产工艺 （1）工艺路线： （2）工艺过程： 酶原加少量胰蛋白酶 ，pH7.6 （四）尿激酶（Urokinase，EC3.4.99.26） 尿激酶，是一种碱性蛋白酶。由肾脏产生，主要存在于人及哺乳动物的尿中。人尿平均含量5～6国际单位／m1。 1、组成（结构）性质 （1）尿激酶有多种分子量形式。尿中的尿胃蛋白酶原，在酸性条件下可以激活生成尿胃蛋白酶，把天然尿激酶降解成为尿激酶。 （2）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋白溶酶原是它唯一的天然蛋白质底物，它作用于精氨酸-缬氨酸键使纤溶酶原转为纤溶酶。尿激酶也具有酯酶活力。 （3）尿激酶的pI为pH8～9，主要部分在pH8.6左右。溶液状态不稳定，冻干状态可稳定数年。加入1％EDTA、人血白蛋白或明胶可防止酶的表面变性作用。 2、生产工艺 （1）工艺路线： （2）工艺过程： 硅藻土吸附 ，0.02％氨水加0.1mol／L氯化钠洗脱。 QAE—Sephadex层析柱 去热原、色素。CM—C浓缩 。 （五）溶菌酶（Lysozyme） 溶菌酶，又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。它广泛存在于鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞和组织（如肝、肾）细胞内，其中以蛋清含量最丰富。 溶菌酶是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质，具有抗菌、抗病毒、抗炎症。 1、组成（结构）和性质 溶菌酶是一碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸、酰氨残基及芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高。 溶菌酶能催化粘多糖或甲壳素中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4糖苷键。 溶菌酶是一种罕见的稳定蛋白质。在pH5.5 加热4h后，酶变得更活泼。低浓度的Mn（10-7mol／L）在中性和碱性条件下能使酶免受热的失活作用。 2、生产工艺 （1）工艺路线 （六） L-天门冬酰胺酶 （L-asparaginase） 1、组成（结构）、性质 L-天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶，是从大肠杆菌菌体中提取分离的酶类药物，用于治疗白血病。 性状呈白色粉末状，微有湿性，溶于水，不溶于丙酮、氯仿、乙醚及甲醇。最适pH8.5，最适温度37℃。 L-天门冬酰胺酶的产生菌是霉菌和细菌，故可作制造酶的原料。 2、生产工艺 （1）工艺路线： （七）超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase SOD） 超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂，作为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国有产品，此酶属金属酶，它催化的化学反应是： 由于SOD能专一清除超氧阴离子自由基（O2-）；故引起国内外生化界和医药界的极大关注。目前SOD临床应用集中在自身免疫性疾病上如类风湿关节炎、红斑性狼疮、皮肌炎、肺气肿等；也用抗辐射，抗肿瘤、治疗氧中毒、心肌缺氧与缺血再灌注综合征以及某些心血管疾病。 1、组成（结构）、性质 SOD属金属酶，其性质不仅取决于蛋白质部分，还取决于活性中心金属离子的存在。按金属离子种类不同，SOD有Cu，Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD。三种酶都催化同一反应，但其性质有所不同，其中Cu，Zn-SOD与其它两种SOD差别较大，而Mn-SOD与Fe-SOD之间差别较小。 （2）SOD的活性中心和构象比较特殊，金属辅基Cu和Zn与必需基团His等形成咪唑桥 。 （3）SOD的理化性质 SOD是一种金属蛋白，因此它对热、对pH及在某些性质上表现出异常的稳定性。 ①对热稳定性 SOD对热稳定。但SOD对热稳定性与溶液的离子强度有关，如果离子强度非常低，即使加热到95℃，SOD活性损失亦很少。 ②pH对SOD的影响 SOD在pH5.3～10.5范围内其催化速度不受影响。如pH3.6时SOD中Zn要脱落95％，pH12.2时，SOD的构象会发生不可逆的转变，导致酶活性丧失。 ③吸收光谱 ④金属辅基与酶活性 SOD是金属酶，Cu与Zn的作用是不同的，Zn仅与酶分子结构有关，而与催化活性无关，而Cu与催化活性有关，透析去除Cu则酶活性全部丧失，一旦重新加入Cu，酶活性又可恢复。同样， Mn和Fe与Cu一样，