白色念珠菌3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及表达.pdf

京 口腔医学 2013年第 21卷第5期 BeiiingJournalofStomatology October2013．V01．21．N0．5 白色念珠菌 3一磷酸甘油醛脱氢酶基因的 克隆及表达 赵珊梅 袁雪岩 石建峰 李 昂 苗群爱 摘【要】 目的 构建白色念珠菌3一磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)的表达载体并使其在大肠杆菌中正确表达。 方法 提取基因组总RNA，PCR方法获得GAPDH基因，构建其原核表达质粒pET-32a(+)．GAPDH，转化大肠杆 菌BL21菌株 ，经 IPTG诱导产生蛋白，用 SDS和WesternBlotting检测GAPDH蛋白表达情况。结果 构建的 白色念珠菌GAPDH基因表达质粒经序列测定证实 ，与GenBank数据完全一致。双酶切鉴定证实，克隆基因正确插 入pET一32a(+)载体。在 1．0mmo]·L 的 IPTG浓度诱导下表达，可观察到相对分子量51kDa的蛋 白，经 SDS— PAGE和WesternBlotting检测证实为GAPDH蛋白。结论 实验成功克隆白色念珠菌GAPDH基因，并在大肠杆菌 中正确表达，为白色念珠菌感染的候选疫苗奠定工作基础。 【关键词】 白色念珠菌；3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)；原核表达；SDS．PAGE；WesternBlotting 【中图号】 R780．2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1006-673X(2013)05-0257-04 CloningofCandidaalbicansglyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenasegeneanditsexpressioninEscherichiaeoli ZHAOShah—mei，YUAN Xue—yan，sHIJian币ng，LIAng，MIAO Qun一以DepartmentofPeriodontology，Colgeof Stomatology．XianJiaotongUniversity． an710004，China 【Abstract】 objective ToconstructtheexpressionplasmidofCandidaalbicansglyceraldehyde一3一phosphate dehydrogenase(GAPDH)geneandtransforlnitintotheEscherichiacoli(E．col)correctly．Methods ThegenomeRNA wasextracted andGAPDH geneobtainedbyPCR to consturctaprokaryotic expression plasmidpET．32a (+)． GAPDH．pET．32a (+)-GAPDH wastransformedintoE colBL21．山eproteinobtainedbyIPTG induction．GAPDH proteinexpressionwasexaminedbySDS—PAGEandWesternBlotting．Results CandidaalbicansGAPDH geneexpression wascompletelyconsistentwith GenBank data．IntheIPrrG concentrationof1．0 mmol ·L_。．theproteinatamolecular weightof51kDawasobservedandconfirmedasGAPDH protein．Conclusion TheGAPDH geneofCandidaalbicanswas success~ullyclonedanditsproteinwasexpressedcorrectlyinE coli．． K【eywords】 Candidaalbicans；Glyceraldehyde一3一phosphatedehydrogenase；Prokaryoticexpression；SDS—PAGE； W esternBlotting 白色念珠菌是临床最常见的致病真菌，在系统 作用。研究表明，白色念珠菌