尿液标本和粪便标本的病原学.ppt

尿液标本和粪便标本的病原学检查 华中科技大学同济医院检验科 李丽 陈中举 尿液标本的病原学检查 尿液标本的病原学检查 目的要求 掌握尿液标本的接种和分离培养 掌握尿液标本的细菌学检验程序和方法 掌握尿液标本的细菌计数方法 器材和试剂 标本：自配菌液（E.coli) 培养基：羊血琼脂平板、 克氏双糖铁琼脂（KIA)、蛋白胨水培养基、枸橼酸盐培养基、七叶苷培养基、尿素培养基、赖/鸟氨酸培养基 试剂：靛基质试剂、3%过氧化氢、氧化酶试剂、革兰染色液 步骤和方法 标本采集 中段尿采集法 导尿法 肾盂尿收集法(膀胱镜） 膀胱穿刺法 留尿法 无菌操作！ 检验程序 菌落计数和报告方式 菌落计数 直接计数法 标本混匀，1滴于载玻片，覆盖盖玻片，相差显微镜观察每个视野的细菌数，估计尿液中的细菌数 ≥ 100/每视野-----≥107/ml ≥ 10/每视野------≥105/ml ≥ 1/每视野-------≥104/ml 定量接种法 定量接种环取尿液，BA上连续划线接种 无菌移液器吸取0.1ml尿液标本，用9.9ml无菌生理盐水稀释，取0.1ml于BA上涂布接种 倾注培养法： 0.1ml尿液标本，用9.9ml无菌生理盐水稀释，取1ml于无菌平皿，加入50℃琼脂，混匀，凝固后孵育 报告方式 有细菌生长，计数菌落，报告“每毫升尿液中细菌数为**” 无细菌生长,”普通需氧培养48h无细菌生长“ 培养目的 普通需氧培养 革兰阴性杆菌（肠杆菌科细菌和非发酵菌） 革兰阳性球菌（葡萄球菌、链球菌、肠球菌） 淋病奈瑟菌 离心，沉淀接种于置35℃预温的淋病奈瑟菌选择性培养基中， 35℃ 5%CO2孵育18~24h,若无细菌生长，继续孵育至48h 结核分枝杆菌 4000rpm/min离心，沉淀涂片2张，分别进行萋-纳氏抗酸染色和潘本汉染色 消化处理后，接种于选择性固体培养基（罗琴培养基、青霉素血液琼脂培养基） 尿液中常见阴性杆菌的生化鉴定 注意事项 粪便标本的病原学检查 肠道标本的细菌学检验 目的要求 掌握粪便标本的采集方法 掌握粪便标本的细菌性检验的程序和方法 器材和试剂 标本：粪便标本 培养基：SS、MAC、克氏双糖铁琼脂（KIA)、蛋白胨水培养基、枸橼酸盐培养基、七叶苷培养基、尿素培养基 试剂：靛基质试剂 选择性培养基 强选择性培养基：SS(Salmonella Shigella agar ) 弱选择性培养基：EMB、MAC等 步骤和方法 标本的采集和运送 可疑粪便：如粘液脓血便、“米泔水样”便 肛拭子 卡布运送培养基 检验程序 常见致病菌检验 常见致病菌检验 2.EPEC、EIEC、ETEC 3.霍乱弧菌 (1)直接检查：直接涂片、悬滴片或压滴片 (2)分离培养：碱性蛋白胨水、TCBS 4.副溶血弧菌 粪便中的常见致病菌及与抗生素相关的腹泻菌 注意事项 选择性平板的使用 急性期、抗生素使用前、床边接种 涂片检查：霍乱、结核、菌群失调 鉴别培养基：氧化酶试验假阳性 选择性平板上挑取菌落，从菌落中心挑取，不用接种环刮取菌落 沙门菌属诱导鞭毛恢复 KIA上的不同生化反应 常见选择性培养基菌落形态 空肠弯曲菌（ Campylobacter jejuni ） 培养基：Camp-BAP血琼脂、Skirrow血琼脂、Butzler血琼脂 培养温度：42℃ 培养条件：微需氧（85％氮气，10％二氧化碳，5％氧气） Campylobacter 艰难梭菌（ Clostridium difficile ） 培养基：CCFA（环丝氨酸－头孢西丁－果糖琼脂） 培养温度：35℃ 培养条件：严格厌氧（80％氮气，10％二氧化碳，10％氢气） 标本要尽快接种（10～20min内完成） CCFA上形态 Clostridium difficile Clostridium difficile colonies are seen after 48hrs growth on a blood agar plat * * G-杆菌 104/ml:污染 105/ml:感染 104/ml, 105/ml :可疑 G+球菌：104/ml 感染 三种或三种以上细菌：污染的可能性大 采取标本后应立即送检，不能及时接种的要存放于4℃冰箱，但不能超过2h 菌落计数的影响因素：抗生素的使用、输液、使用利尿剂、尿液的PH变化 尿液标本中不得加入防腐剂和消毒剂 避免变形杆菌污染：每个平板只接种一个标本或使用可抑制变形杆菌迁徙生长的培养基（MacConkey,CLED) MacConkey E.coli TCBS V.parahaemolyticus SS S.typh