脓汁和粪便标本中病原菌的检测().ppt

培养基的种类（按物理性状分类） 液体培养基:不含凝固剂(琼脂),用于增菌，纯培养,保种。 固体培养基:含1％～2％琼脂，用于分离培养,纯培养,保种。 半固体培基（琼脂高层）:含0.3％～0.5％琼脂，用于动力检测,保种。 营养肉汤 broth tube 琼脂斜面 agar slant 琼脂高层 agar deep Different forms of culture media. 培养基的种类（按用途分类）P3 基础培养基:含一般细菌生长繁殖所需的基本营养成分，可作为一些特殊培养基的基础成分，如普通平板。 营养培养基：在基础培养基中加入血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和须要特殊生长因子的细菌生长，如血平板。 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 选择培养基：在培养基中加入抑制剂抑制杂菌生长，有助于目的菌的生长，如EMB、SS平板。 鉴别培养基：利用细菌分解能力及代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，用来试验细菌的生化反应、代谢产物，如糖发酵管。 厌氧培养基：氧化还原电势低，表面用凡士林和石蜡封住，与空气隔绝，成为无氧环境，如庖肉培养基。 培养基的灭菌 在冷空气完全排尽的情况下，蒸汽压103.43 kPa ,温度可达到121.3℃ ,维持15～30分钟，可以杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15～30分钟。 含糖培养基：115℃灭菌15分钟。 鸡蛋、牛奶培养基:75～100℃30分钟，3次(1天1次)。 不耐高温的液体成分：滤菌器滤过除菌 EK型蔡氏滤器、 G5或G6玻璃滤器、0.45um或0.22um微孔滤膜。 琼脂平板 agar plate 含琼脂的培养基灭菌以后，冷却50～60℃（温度越高，冷凝水越多，越易污染 ），以无菌操作，倾注平皿10ml（直径7厘米平皿），琼脂凝固后形成琼脂平板。 平板主要用于细菌的分离培养和药敏试验。 平板储存待用或做细菌培养时，为什么要倒置？ ①防止平板水分蒸发丢失。 ②防止冷凝水滴于平板表面，影响单菌落形成。 ③…… 琼脂斜面 agar slant 含琼脂的培养基灭菌以后，趁热斜放，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固以后形成一个倾斜的表面。 斜面主要用于纯菌移种和菌种保存。 斜面底部的冷凝水有利于纯菌移种、菌苔形成和菌种保藏。 怎样检查培养基是否合格? ★无菌试验：将待检培养基置于35～37℃培养箱培养24小时，无任何细菌生长为合格。 ★效果试验：将已知的标准参考菌株，接种于待检培养基中，检查细菌的生长繁殖状况和生化反应是否与预期的结果相符合。 细菌生长繁殖的方式和速度 细菌繁殖方式：以二分裂方式进行无性繁殖。 繁殖速度：多数20～30分钟繁殖1代，结核杆菌18～20小时繁殖一代。 细菌生长繁殖曲线 细菌的生长曲线 细菌数量的对数 培养时间 （小时） 5 10 15 20 25 30 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 活菌数 总菌数 迟缓期 对数生长期 稳定期 衰退期 细菌生长曲线意义 迟缓期：一般1～4h，细菌代谢活跃，但不繁殖。 对数期：维持4～8h，细菌快速繁殖，数目呈几何级数增加，细菌形态、染色性、生理活性最典型、对抗菌素最敏感。细菌鉴定选用此期为佳。 稳定期： 通常维持10h，活菌数和死菌数几乎相等，代谢产物形成较多。 衰亡期：培养18 ～24 h以后，代谢逐渐停滞,死菌数超过活菌数。 玻璃器材的洗刷 无污染器皿:洗涤剂洗刷→流水冲洗10次→晾干。 病原菌污染的器材→高压蒸汽灭菌→趁热倒出污物→洗涤剂浸泡→瓶子、试管、吸管用毛刷，平皿用纱布，洗刷干净→流水冲洗10次→晾干。 瓶刷 试管刷 吸管刷 去污粉 纱布 ①试管用毛刷，上下、旋转刷洗内壁和管底。 ②字迹用湿纱布，粘去污粉擦拭。 ③管口朝向相同，流水冲洗10次。 ④洗干净的试管，倒扣在筐内，晾干。 平皿用纱布，旋转擦拭内外侧，字迹用纱布粘去污粉擦拭。 流水冲洗10次。逐个倒扣在筐内，晾干。 玻璃器材洗干净的标准 1.洗涤时观察:洗后的玻璃器材附着在内壁上的水不是个别水珠,而是一层极薄的水膜。 2.干燥后观察:对着光亮处观看玻璃器材,非常透明, 内外壁上不出现大片发白或白点,也无微小污点和粉末。 常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。 试管架上器材：靠近插座一侧第1和第2列分别放置接种针 和接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。 ※器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。 实验器材 整齐有序 医学微生物学实验综合性实验一 脓汁