NY_T 2253-2012菠萝组培苗生产技术规程.pdf

CS 65.020 61NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2253-—2012菠萝组培苗生产技术规程Technical specification for tissue culture of pineapple seedlings2012-12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2253—2012前言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由农业部农垦局提出。本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国热带农业科学院南亚热带作物研究所。本标准主要起草人：咎丽梅、赵艳龙、詹儒林、郑良永、张秀梅、吴维军、张家云。 NY/T 2253—2012菠萝组培苗生产技术规程1范围本标准规定了菠萝[Ananascomosus(L.）Merr.］组培育苗过程中的培养基制备程序、组织培养程序、炼苗和移栽程序。本标准适用于菠萝组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法I.Y/T1882林木组织培养育苗技术规程3术语和定义LY/T1882界定的术语和定义适用于本文件。4培养基制备程序4.1培养基母液配制及保存4.1.1母液配制母液配制所用蒸馏水应符合GB/T6682的规定，各种母液配制所用试剂参见附录A、配制方法见附录B。4.1.2母液保存在培养基母液的容器上应贴上标签，标注名称、浓度、配制日期、有效期和配制人。铁盐及植物生长素母液应在棕色容器中避光保存。各种母液应置于0℃～4℃保存，保存期不超过60d。发现标签不明或母液中有沉淀或浑浊现象应停止使用。4.2培养基配制、灭菌及保存4.2.1培养基配方诱导培养基配方基本培养基(MS)+6-芊氨基嘌呤(6-BA)1mg/L~3mg/L+萘乙酸（NAA)0.1mg/L~0.3mg/ L。继代培养基配方基本培养基(MS)+6-芊氨基嘌呤(6-BA)1mg/L～3mg/L。生根培养基配方1/2基本培养基(1/2MS)十6-苄氨基嘌呤(6-BA)1mg/L十萘乙酸(NAA)0.1mg/L~0.5mg/L十吲哚乙酸(IAA)0.1mg/L~1mg/L。4.2.2培养基配制琼脂和蔗糖溶液配制用感量0.1g天平分别称取琼脂5.0g~8.0g和蔗糖30.0g。先用蒸馏水700mL加热、搅拌溶解琼脂，然后加入蔗糖继续搅拌溶解。1 NY/T2253--20诱导培养基配制按附录B吸取母液加人到，依次加人20mL(B.1)、10mL(B.2)、1mL(B.3）)、20mL(B.4)、1mL(B.5)、1mL~3mL(B.6)、0.1mL~1mL(B.8)，再加蒸馏水定溶至1000mL，用0.1mol/L盐酸(HCI)或0.1mol/L的氢氧化钠(NaOH)调节pH至5.8。继代培养基配制按附录B吸取母液加人到,依次加人20mL(B.1)、10mL(B.2)、1mL(B.3)、20mL(B.4)、1mL（B.5）、1mL~3mL(B.6)，再加蒸馏水定溶至1000mL，用0.1mol/L的盐酸（HCI)或0.1mol/L的氢氧化钠(NaOH)调节pH至5.8。生根培养基配制按附录B吸取母液加入到，依次加人20mL(B.1)、10mL(B.2)、1mL(B.3)、20mL(B.4)、1mL(B.5)、1mL(B.6)、0.1mL~1mL(B.7)、0.1mL~0.5mL(B.8)，再加蒸馏水定溶至1000mL，用0.1mol/L的盐酸(HCI)或0.1mol/L的氢氧化钠(NaOH)调节pH至5.8。分装用250mL的培养瓶，每瓶分装33mL～40mL。封口盖好瓶盖或用封口膜封口。4.2.3培养基灭菌培养基配制后应在12h内完成灭菌程序。采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121℃条件下按表1所需时间灭菌。表1培养基高压蒸汽灭菌所需时间培养容积灭菌时间mLmin20~50≥1575~150≥20≥25250~5001000≥301 500≥352 000≥404.2.4培养基保存灭菌后的培养基应注明培养基编号及配制日期，并应在15d内使用。培养基在保存过程中注意防尘、避光，避免污染。5菠萝组织培养程序5.1外植体选择选择健康、无病虫害的顶芽或者吸芽、托芽、腋芽等作为外植体。5.2外植体消毒自来水冲洗外植体，选择表2所列消毒剂之一消毒，再用无菌水冲洗4次～6次。2 NY/T 2253—2012表2外植体消毒剂、使用浓度和浸泡时间使用浓度浸泡时间消毒剂名称%min乙醇(CH,OH)70~750. 2~22~10次氟酸钠(NaCIO)5~30过氧化氢(H20）10~125