大肠杆菌_枯草杆菌穿梭表达载体的构建及改造.pdf

第 15 卷第 6 期 :5 生 　物 　技 　术 Vol15 ,No6 :5 　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　 2005 年 12 月 BIOTECHNOLOGY Dec2005 能力都未丢失 ,且 5′- 3′的方向的启动能力小于 3′- 5′的方向 的启动能力 ,但都比未缺失的强 。每种转化子的抗性均随着 Zeocin 抗性浓度增加而减少 。四种转化子的 Zeocin 抗性水平 由强至弱分别为 pUCMZ1′、pUCMZ2′、pUCMZ1 、pUCMZ2 。缺失 SacI 段的启动子比未缺失的强 ,推测可能与切除了中间的4 个 GC 区有关 。 3 　讨论 已知 MAL 1 启动子区可进行两个方向的转录 ,5′- 3′方向 的启动子在真核生物汉氏酵母和酒精酵母中都有启动外源基 图4 　MAL 1 启动子常用酶谱分析 因的功能 ,而 3′- 5′方向是否有启动外源基因的功能则 目前尚 Fig. 4 　Usual enzyme analysis of MAL 1 promoter 没有报道[2 ] 。而该双向启动子在原核生物大肠杆菌中是否有 2 . 5 　MAL 正反向启动子及缺失 SacI 段的启动子的 Zeocin 抗 双向启动外源基因的功能则 目前也未有报道 。 性水平分析 本研究将启动子 以两种不同的方 向克隆进 同一种质粒 ( ) 利用重组质粒 pUCMZ1 、pUCMZ2 、pUCMZ1′、pUCMZ2′转化 中 , 用 Zeocin 抗性基因作为报告基因 图 1 并转化 E. coli 细 大肠杆菌 DH5α,对四种转化子在不同浓度的 Zeocin 抗性条件 胞 ,通过检测报告基因 Zeocin 的抗性表达 ,证实了该启动子在 下 ,进行抗性水平的定性试验 。 原核生物大肠杆菌中有双向启动能力 。在研究蛋白质功能的 结果显示阴性对照的 DH5α受体菌在抗性平板上均无转 时候 ,需要考虑蛋白