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实验7

细胞内过氧化物酶的显示

联苯胺反响

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【实验目的】

l掌握联苯胺反响法显示细胞内过氧化物酶的原

理和方法。

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过氧化物酶-定义

l利用过氧化氢作电子受体来催化底物氧化作

用的酶。

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【实验原理】

l细胞内的过氧化物酶可以催化过氧化氢氧化联

苯胺成蓝色或者棕色产物，蓝色为中间产物联

苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯

胺腙，通过产物颜色间接显示出细胞内过氧化

物酶的分布。

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【实验仪器、材料和试剂】

l光学显微镜；小白鼠、剪刀、镊子、载玻片、

牙签、吸管。

l0.5%CuSO4〔0.5克CuSO4溶于100ml蒸馏

水中〕、联苯胺混合液〔0.1克联苯胺在研钵

中加少许蒸馏水研成细浆，参加100ml蒸馏水，

过滤后参加2滴3%双氧水，放棕色瓶中备用〕、

1%番红[1克番红O〔SafranineO〕染料溶于

100ml蒸馏水中]。

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【实验步骤】

l用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开大腿上的皮肤和肌肉，

取出股骨；

l剪断或者折断股骨，用牙签挑取骨髓，放置于载玻片

上制成涂片，晾干；

l将涂片上滴加几滴0.5%CuSO4，固1分钟；

l倾去CuSO4溶液，滴加0.1%联苯胺混合液，染色6分

钟；

l用自来水或蒸馏水冲洗，滴加1%番红染液〔染色细胞

轮廓〕，染色1分钟；

l用自来水或者蒸馏水冲洗，空气中晾干，显微镜下观

察。

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颈椎脱臼法处死小鼠

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【观察与结果】

l骨髓细胞内可以见到蓝色或者棕色的颗粒，

即过氧化物酶所在的部位

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