色方案抗体组合设计__培训课件.ppt

* * * * * * * * * 离散程度即CV很大。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * CD38 记忆T细胞 CD8，CD4均有表达。活化程度。 * * * * * * * * * * * * * * CD45RA+ 幼稚、静止 central memorty cell (中央记忆T细胞分泌IL-2，但不产生IRN-R和IL-4) Eeffiective 效应记忆T细胞不表达CD62L,CCR7CD45RA,但产生IRN-R和IL-4 不洗涤过程加快数据分析 错误的抗体组合即使是进行洗涤也无法得到好的结果！ no wash wash 样本制备过程对检测的影响 抗体组合设计很大程度上会影响你的结果！ 分析目标细胞群: CD3+CD4+CD25+ / CD3+CD4+CD38+ CD3+CD8+CD25+ / CD3+CD8+CD38+ 抗体组合设计很大程度上会影响你的结果！ FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APCAF700 APCA750 PacBlue KrOrange CD4 CD184 CD69 CD25 CD279 CD8 CD127 CD3 CD57 CD45 抗体组合设计很大程度上会影响你的结果！ FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APCAF700 APCA750 PacBlue KrOrange CD57 CD184 CD8 CD25 CD279 CD69 CD127 CD45 CD4 CD3 抗体组合设计很大程度上会影响你的结果！ Let’s Do Some Sensitivity Workout ! 实验部分（“ 表型分析”） 人的EDTA抗凝全血 单标荧光补偿抗体： CD8-FITC, CD3-PE, CD5-ECD, CD19-PC5.5， CD5-PC7，CD4-APC, CD8-APCA700，CD3-APCA750, CD3-PB, CD4-KO 10C抗体组合（验证管）：CD16-FITC,CD127-PE,CD19-ECD,CD25-PC5.5， CD56-PC7，CD4-APC,CD8-APCA700，CD3-APCA750，HLA-DR-PB,CD45-KO 溶血素 10C 方案-样本制备 标记12支试管，分别为阴性对照，单色补偿和10色。 分别不同试管里加入对应的单色补偿试剂和10色混合试剂，阴性对照管不加抗体，室温暗处孵育15分钟 Optilyse C 溶血素溶血10分钟 加入PBS 300g离心5分钟，弃上清，加入500ul PBS上机检测。 样本制备 阴性对照管调节电压，用flow-set 标准微球标准化PMT. 上机检测 根据标准化信号（ Flow-Set beads ）对特异的应用和染料进行PMT电压的调整。 标准化仪器设置可以确保可重复结果。 (质控血) 仪器校准和标准化 (质控血) 仪器校准和标准化 标准化仪器设置可以确保可重复结果。 AN26093 AS19123 AT13106 仪器校准和标准化 单标样本自动做荧光补偿。 10C结果分析。 上机检测 筛选组合 成熟/ 淋巴细胞筛选: 不成熟 / 急性白血病筛选: Small Samples : 目的: 识别如下细胞群: T cells: CD8+T cells; T Regs; Na?ve and central memory CD4+T cells; Effector CD4+T cells; NK cells; NKT cells and B cells 检测活化标志: HLA-DR 染色策略: 9C 组合 PB KrO FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC-A700 APC-A750 HLA-DR  CD25 CD127 CD45 CD19 CD56 CD4 CD8 CD3 A74781  IM0478U IM1980U IM2710U A66328 A51078 IM2468U A66332 A66329 过程: 全血，溶血，洗涤 目的: 识别如下细胞群: T cells: precursors， Na?ve and Effector Tregs; Na?ve and C