超声靶向微泡破裂技术联合shrna质粒沉默toll样受体4基因.pdf

284 Chin J Stroke, Apr 2015, Vol 10, No.4 ·论著· 超声靶向微泡破裂技术联合shRNA 质粒沉默Toll样受体4基因 1 1 1 2 1 1 1 郑 ，梁燕玲，陈佳，陈智毅，李斯颖，罗建华，方小波 基金项目 【摘要】 广东省自然科学基金面上 目的 Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）4表达水平与脑缺血合并高血糖后的痫性发作及脑梗死预 项目（S2011010004147） 后相关，本文探讨超声靶向微泡破裂（ultrasound-targeted microbubble destruction，UTMD）联合短发夹 作者单位 1 核糖核酸（short hairpin ribonucleic acid，shRNA）干扰技术沉默TLR4的可行性和应用价值。 510150 广州 方法 将32只实验用Wistar大鼠分为4组：空白对照组（NS）、裸质粒组（P）、质粒联合超声辐照组 广州医科大学附属第三 医院神经内科 （P+UTMD）、质粒与SonoVue联合超声辐照组（P+S+UTMD），每组各8只。裸质粒组注入质粒，质粒联 2广州医科大学附属第三 合超声辐照组注入质粒行超声辐照，质粒与SonoVue联合超声辐照组侧脑室注入质粒和SonoVue微泡 医院超声医学科 并行超声辐照，处理4 d后每组取5只大鼠行Western Blot检测大脑TLR4蛋白表达，取3只大鼠行免疫组 通信作者 织化学染色。 梁燕玲 结果 质粒联合超声辐照组和质粒与SonoVue联合超声辐照组抑制效果明显（P+S+UTMD： elaine.liang@163.com 0.223±0.009，P+UTMD：0.277±0.013，t1，3=4.900，P＜0.01；t1，4=8.779，P＜0.01），裸质粒组与空白 对照组差异无显著性（NS：0.351±0.030，P：0.339±0.034，t1，2=0.590，P ＞0.05），而质粒与SonoVue 联合超声辐照组与质粒联合超声辐照组相比抑制效果更好（P+S+UTMD：0.223±0.009，P+UTMD： 0.277±0.013，t3，4=7.006，P＜0.05）。免疫组织化学的平均光度值分析显示，质粒联合超声辐照组和 质粒与SonoVue联合超声辐照组抑制效果明显（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014， t =8.334，P＜0.01；t =21.027，P＜0.01），裸质粒组与空白对照组差异无显著性（NS：0.079±0.0048， 1，3 1，4 P：0.077±0.0012，t1，2=0.797，P ＞0.05），而质粒与SonoVue联合超声辐照组与质粒联合超声辐照组相 比抑制效果更好（P+S+UTMD：0.026±0.0013，P+UTMD：0.058±0.0014，t3，4=33.254，P＜0.05）。 结论 超声微泡造影剂联合shRNA质粒可高效稳定沉默TLR4基因。 【关键词】 超声；微泡；Toll样受体4；基因；核糖核苷酸干扰