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人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1启动子荧光素酶报告基因重组体的构建.pdf

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Medical No.3 2∞8 ·217· 新乡医学院学报Jamlal0fXiIlxi∞gc0Ue萨V01.25May ·基础研究· 人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1启动子荧光素酶报告基因重组 体的构建 周广举1,梁自文1,陈渝2,王裴2,张小容2 (1.第三军医大学西南医院内分泌科,重庆枷038;2.第三军医大学西南医院烧伤研究所,重庆400038) 摘要: 目的构建内皮细胞高表达脂多糖相关因子l(EOLAl)基因启动子的报告基因重组质粒,为EOLAl启动 子的分析鉴定奠定基础。方法提取人内皮细胞基因组DNA,设计引物克隆EOLAl基因上游不同长度的基因片段,插 入到含荧光素酶报告基因的载体pGD.B酗ic中,经限制性内切酶酶切鉴定、测序。结果成功构建了3种含有不同长 度EOLAl上游基因的报告基因系统为EOLAl启动子的活性分析奠定了基础。 关键词: 内皮细胞高表达脂多糖相关因子l;启动子;荧光素酶报告基因 中图分类号:R394文献标识码:A文章编号:1004-7239(2008)03·0217-03 CoI坞tnlctionof化combinantof of luc№ra∞promoterreportergene f.actor1 lvsaccha—de.associated ZHOU Guang-jul,UANGZi-wenl,CHENYu2,以口Z 400038,吼i舭;2.k廖 (1.DeP州胧,lI妒眦而m研,SDm.Il嬲f月呷如以旷池弛刹肘抛n可脓舭以胁渤e聆酊,‰,研觇r 400038,傩流n) f姚矿曰£朋s,SD以^嬲t胁印如以旷fk孤刹施胁,y胁d如耐£,n沁巧妙,cb,研i,lg of of Toco璐tmcterecombin舳tlucifer鹊e Abs蛔ct:objective pmIImter地portergeneendothelial—overexpre8舱dlipopo. factor wouldbeusedintlle for deteminatioll.Methods 1ysacch撕de-associated1(EOLAl),which fouowingresearchpro啪ter of toclonedifre阳nt oftlle Gen锄icDNAhumanendothelialceU w酗prepa陀d,and8pecificpdme璐we他designed len群h up. of we陀i璐ertedintotlle whichw勰thevector st陀咖m百。璐.The∞DNAfh舯ents pGD—B鹅ic lucifera∞陀ponerge舶.7rhe∞ recombin锄t wem witll dete皿i∞d nree reponergene dige8毛edr鄂tricti咖e舷yme明dthe∞quence.1t哪I协expressi∞pl鹪一 of nu呲∞ein’vithdi雎rem therec砌bin锄t mid《pGL3-EOLAl一Luc len舢《upstre枷ge
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