《微生物的分离和培养》名师课件.ppt
微生物的类群原生生物:原核生物:真菌:病毒:如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等细菌、蓝藻◆微生物的共同特点:个体微小、结构简单培养微生物需要解决的两个问题1、为其提供合适的营养条件和环境条件2、防止杂菌的入侵培养基、培养条件无菌技术(获得纯净培养物)思考:1.何为培养基?3.不同的培养基有不同的配方,但是其基本成分都相同,都包括哪些营养元素?有何作用?请举例说明。阅读教材第9页(配制培养基)和第10页实践1.2.3相关内容,回答以下问题:2.按照不同的培养基划分标准,培养基有哪些种类、配制特点及其应用?一、培养基1.培养基的种类液体培养基半固体培养基固体培养基据物理性质分天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基基础培养基据用途分常用于工业生产常用于观察微生物的运动、鉴定菌种用于微生物的分离、计数用化学成分不明确的天然物质配成如加入血清血浆等根据细胞生存所需要的种类和数量用人工方法模拟合成在培养基中加入(或缺少)某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。例如,在培养基中加入青霉素,以抑制细菌、放线菌的生长,从而分离到酵母菌和霉菌。又如,在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色葡萄球菌的生长。根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微生物。例如,在培养基中加入伊红和美蓝,可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌:如果有大肠杆菌,其代谢产物就与伊红和美蓝结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽。含有一般微生物生长繁殖所需要的基本营养物质(牛肉膏蛋白胨培养基)基本成分:碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源:有机碳源:CO2、HCO3-糖类等含碳有机物质自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源:有机氮源:N2、NH3牛肉膏、蛋白胨注:有机C源为异养型微生物提供碳源和能源含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方此外,还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质(如:生长因子)以及氧气等的要求。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g1.无菌技术目的?方法?2.什么是消毒?灭菌?两者有何区别?3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些?有何要求?4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。二、无菌技术阅读教材第8页及第10页(5)11-12页的(3)相关内容,回答以下问题:1、灼烧灭菌灭菌的方法:2、干热灭菌:160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌:100kPa、121℃下维持15-30min.二.无菌范围:实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程(酒精灯旁操作)超净工作台1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。三、实验操作(大肠杆菌的纯化培养)(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)1.计算、称量2.溶化3.调pH:pH7.64.分装:分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。5.加塞6.包扎操作步骤包器材包器材涂布器接种环接种针实验过程录像1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?答:以免接种环温度太高,杀死菌种。3.在作第