微生物的纯种分离培养及接种技术课件.ppt

5-1 微生物的纯种分离培养及接种技术 一．实验目的 通过学习学习微生物的纯种分离，培养和接种技术，进而学会微生物生理生化反应的实验，为废水处理服务。在水处理的细菌检查中，细菌的分离，培养和接种也是一个重要的环节。微生物的纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。 二. 实验器材 1.无菌培养皿（直径90mm），无菌吸管，无菌锥形瓶，无菌试管，5管无菌水（每管有9ml灭菌过的自来水）。 2.营养琼脂培养基（已灭菌的），活性污泥。 3,接种环，酒精灯，恒温箱，等。 三. 实验内容 （一）培养基的制备及灭菌 1. 玻璃器皿的包扎与灭菌 （1） 六套培养皿一组, 用报纸包装。 （2） 取四支吸量管，在其吸端塞少许棉花后用长报纸条包扎。 （3） 干热灭菌:上述玻璃器皿在160°C烘箱内2小时。 2.无菌水的制备 在3支试管中各装入9ml自来水，塞上硅胶塞, 同下述培养基一起用高压蒸汽灭菌。 3. 培养基的制备 ⑴ 称量：牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 自来水 　　　　　 0.75g 1.5g 0.75g 3g 150ml ⑵ 溶化：用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水。 ⑶ 调pH值： 溶液稍冷后用pH试纸、10% NaOH或10%HCl 调整溶液 的 pH在7.6左右。 ⑷ 分装：试管4支各装其高度1/5的溶液，其余溶液装锥形瓶。 ⑸ 加塞包扎 ：锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。 ⑹ 湿热灭菌 ： （高压蒸汽灭菌）1.05kg/cm2(103kPa)、 121℃灭菌 20min。 ⑺ 搁置斜面： 试管培养基冷至50℃时斜搁使斜面长度不` 超过试管一半。 （二）微生物的分离、培养及形态观察 2.稀释平板分离法 (1) 取样 … (2) 稀释水样 以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管和无菌水将10-3倍的水样稀释至10-4、10-5、10-6倍。 (3) 平板制作 将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓度的水样各吸0.5ml 于相应的培养皿中。加热融化培养基，待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml 入培 养皿中，马上将培养皿平 放桌上 轻轻转 动使之混合均匀， 冷却后 成平板。 倒置，于 37℃培 养48小时后观察 结果。 三．操作方法及步骤 四、实验报告要求 1) 实验名称，学生姓名，学号，班号和实验日期 2) 实验目的和要求 3) 实验仪器，设备和材料 4) 实验原理 5) 实验步骤 6) 实验原始记录 7) 实验数据计算结果 8) 实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思考题，写心得体会 * * 实验四 1. 平板划线分离法 (1) 倒平板: 将融化并冷至50℃的细菌培养基倒约15~20ml于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之均匀。冷后成平板。（3个） (2) 划线：在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如下三种： 划线完毕后 盖上皿盖，倒置 于37℃恒温箱中 培养48小时后观 察结果。 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 （二）其他一些接种的操作技术 1．斜面接种技术 2．液体接种 3．由液体培养基接种到液体培养基 4．穿刺接种